人促甲狀腺素釋放激素(TRH)ELISA試劑盒實驗原理:
人促甲狀腺素釋放激素(TRH)ELISA試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人促甲狀腺素釋放激素(TRH)水平。用純化的人促甲狀腺素釋放激素(TRH)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入促甲狀腺素釋放激素(TRH),再與HRP標記的促甲狀腺素釋放激素(TRH)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的促甲狀腺素釋放激素(TRH)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中人促甲狀腺素釋放激素(TRH)水平。
ELISA試劑盒優(yōu)勢:
1、、靈敏、特異的抗體
2、穩(wěn)定的重復性和可靠性
3、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相載體
4、適用血清、血漿、組織勻漿液、細胞培養(yǎng)上清液、尿液等等多種標本類型
5、種屬齊全:人(Human)、大鼠(Rat)、小鼠(Mouse)、猴(Monkey)、兔(Rabbit)、豬 (Pig)、馬(Horse)、魚、雞、鴨、羊等等
6、可檢測指標齊全:細胞因子檢測、心肌梗塞檢測、內分泌檢測、肝纖維化檢測、自身免疫檢測、腫瘤標志物檢測、傳染病檢測、特種蛋白檢測、優(yōu)生優(yōu)育檢測等等。
人促甲狀腺素釋放激素(TRH)ELISA試劑盒操作步驟:
1. 標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品孔10孔,在*、第二孔中分別加標準品100μl,然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為180U/mL, 120U/mL , 60U/mL, 30U/mL,15 U/mL)。
2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
11. 測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應
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