漫漫人生路，誰都難免會(huì)遭遇各種失意或厄運(yùn)。在凄風(fēng)苦雨慘霧愁云的考驗(yàn)面前，一個(gè)強(qiáng)者，是不會(huì)向命運(yùn)低頭的。風(fēng)再冷，不會(huì)永遠(yuǎn)不息；霧再濃，不會(huì)經(jīng)久不散。風(fēng)息霧散，仍是陽光燦爛。接下來給大家講講細(xì)胞凍存與復(fù)蘇 。

    細(xì)胞凍存

    1. 實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：細(xì)胞室及工作臺(tái)紫外線照射15min；培養(yǎng)液、PBS、胰酶、小牛血清、DMSO、恒溫水浴箱37℃預(yù)熱備用；收集對(duì)數(shù)生長期細(xì)胞，在凍存前一天換液

    2．用吸管吸出培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞培養(yǎng)液，PBS清洗2遍吸出沖洗液，加入適量胰蛋白酶消化。

    3. 適時(shí)去掉胰蛋白酶，加入少量新培養(yǎng)液。吸管吸取培養(yǎng)液吹打瓶壁上的細(xì)胞，使其成為均勻分散的細(xì)胞懸液。

    4. 用吸管將培養(yǎng)液加入凍存管中，離心(1000r/min，10分鐘)。

    5. 去上清液，加入與細(xì)胞懸液等量的凍存液，用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻

    6. 冷存管置于4℃10分鐘----20℃30分鐘----80℃16～18小時(shí)(或隔夜)---液氮槽vaporphase長期儲(chǔ)存。-20℃不可超過1h，以防止胞內(nèi)冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

    7．記錄每一個(gè)冷凍管的位置以確保在以后應(yīng)用時(shí)能夠找到每一個(gè)冷凍管。

    細(xì)胞復(fù)蘇

    1.室內(nèi)紫外消毒；培養(yǎng)基、PBS于37℃恒溫水浴預(yù)熱備用。

    2.自液氮罐中取出冷凍管，立即放入37℃水槽中快速解凍，離心。

    3.去上清，加入培養(yǎng)基，吹打，然后移入培養(yǎng)瓶中，用培養(yǎng)基清洗凍存管，清洗液也移入培養(yǎng)瓶中。

    4.于培養(yǎng)瓶中加入適量培養(yǎng)基，放入CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)

    5.記錄復(fù)蘇日期；次日換液。