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ELISA的基礎是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。影響ELISA實驗結果的因素很多,加強各個環(huán)節(jié)的質量保證才能充分發(fā)揮其方法學的優(yōu)點。那么ELISA實驗需要哪些物品呢?
一、試劑
①包被緩沖液(PH9.60.05M碳酸鹽緩沖液):
Na2CO3 1.59克
NaHCO3 2.93克
加蒸餾水至1000ml
②洗滌緩沖液(PH7.4PBS):0.15M
KH2PO4 0.2克
Na2HPO4·12H2O 2.9克
NaCl 8.0克
KCl 0.2克
Tween-20 0.05% 0.5ml
加蒸餾水至1000ml
③稀釋液:
牛血清白蛋白(BSA):0.1克
加洗滌緩沖液至100ml
或以羊血清、兔血清等血清與洗滌液配成5~10%使用。
④終止液(3M H2SO4):
蒸餾水178.3ml,逐滴加入濃硫酸(98%)21.7ml。
⑤底物緩沖液(PH5.0磷酸棗檸檬酸):
0.2MNa2HPO4(28.4克/L)25.7ml
0.1M檸檬酸(19.2克/L)24.3ml
加蒸餾水50ml。
⑥TMB(四甲基聯(lián)苯胺)使用液:
TMB(10mg/5ml無水乙醇)0.5ml
底物緩沖液(PH5.5) 10ml
0.75%H2O2 32μl
⑦ABTS使用液:
ABTS 0.5mg
底物緩沖液(PH5.5) 1ml
3%H2O2 2μl
⑧抗原、抗體和酶標記抗體。
⑨正常人血清和陽性對照血清。
二、器材
①聚苯乙烯塑料板(簡稱酶標板)40孔或96孔,ELISA檢測儀,50μl及100μl加樣器,塑料滴頭,小毛巾,洗滌瓶。
②燒杯、玻璃棒、試管、吸管和量筒等。
③4℃冰箱,37℃孵育箱。
三、自備材料
①蒸餾水。
②加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
③振蕩器及磁力攪拌器等。
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