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過(guò)氧化氫檢測(cè)試劑盒使用說(shuō)明:
1. 樣品測(cè)定的準(zhǔn)備:
(1)細(xì)胞或組織樣品的制備
對(duì)于培養(yǎng)的細(xì)胞,先收集細(xì)胞到離心管內(nèi),棄上清,按照每100萬(wàn)細(xì)胞加入100-200微升過(guò)氧化氫檢測(cè)
裂解液的比例加入裂解液,隨后充分勻漿以破碎并裂解細(xì)胞。4℃約12000g離心3-5分鐘,取上清,用
于后續(xù)測(cè)定。組織樣品按照每5-10mg組織加入100-200微升裂解液的比例進(jìn)行勻漿。4℃約12000g離
心3-5分鐘,取上清用于后續(xù)測(cè)定。以上所有操作均需在4℃或冰上操作。制備好的細(xì)胞或組織樣品如
果不立即測(cè)定,可以-20℃凍存。
(2)培養(yǎng)細(xì)胞上清液樣品的制備
培養(yǎng)細(xì)胞的上清液可以直接用于后續(xù)的測(cè)定。
(3)血清、血漿或尿液樣品的準(zhǔn)備:
配制50mM磷酸緩沖液,pH為6.0。用pH為6.0的50mM磷酸緩沖液把樣品稀釋50倍。例如4微升樣品稀釋
到196微升pH為6.0的50mM磷酸緩沖液中。稀釋后即可用于后續(xù)的測(cè)定。
2. 標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定的準(zhǔn)備:
樣品在什么溶液中標(biāo)準(zhǔn)品也需用什么溶液稀釋,這樣可以減小誤差。例如對(duì)于細(xì)胞樣品,標(biāo)準(zhǔn)品宜用
過(guò)氧化氫檢測(cè)裂解液稀釋,對(duì)于培養(yǎng)細(xì)胞的上清液樣品,標(biāo)準(zhǔn)品宜用相應(yīng)的細(xì)胞培養(yǎng)液稀釋。標(biāo)準(zhǔn)溶
液可以稀釋成1、3、10、30、100微摩爾/升,或1、2、5、10、20、50、100微摩爾/升,初次測(cè)定后
知道樣品的濃度范圍后可以對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品在樣品濃度范圍附近密集測(cè)定。
3. 過(guò)氧化氫濃度的測(cè)定:
(1)把過(guò)氧化氫檢測(cè)試劑在冰上或冰水浴上融解。
(2)在檢測(cè)孔或檢測(cè)管內(nèi)加入50微升樣品或標(biāo)準(zhǔn)品。
(3)在每個(gè)孔內(nèi)加入100微升過(guò)氧化氫檢測(cè)試劑。
(4)輕輕振蕩或敲打混勻,室溫(15-30℃)放置30分鐘。然后立即測(cè)定A560。如測(cè)A560有困難,波長(zhǎng)
可以選擇540-570nm。
(5)根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品中過(guò)氧化氫的濃度。
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