人脈絡(luò)叢上皮細(xì)胞 , HCPEpiC 細(xì)胞5×10^5以上/1ml
對于大多數(shù)細(xì)胞研究工作者來說，人脈絡(luò)叢上皮細(xì)胞 , HCPEpiC 細(xì)胞污染那可是個糟糕的事情，也是比較容易出現(xiàn)的情況，我們?nèi)绾畏婪?，如何避免，是我們要學(xué)習(xí)和掌握的。
甲苯胺藍(lán)-DNA酶瓊脂 100 用于核糖核酸酶測定
葡萄球菌選擇性瓊脂110（CHAPMAN瓊脂） 250g 用于*的分離培養(yǎng)
人脈絡(luò)叢上皮細(xì)胞 , HCPEpiC 細(xì)胞*卵黃培養(yǎng)基 250g 用于*的分離培養(yǎng)（Japan方法）
V-J瓊脂 250g 病源標(biāo)本和其他標(biāo)本中*陽性*的選擇性分離（Merck方法）
改良Giolitti-Cantobi肉湯 250g 用于*的增菌培養(yǎng)
*高鹽瓊脂 250g 用選擇性分離培養(yǎng)
TMP瓊脂培養(yǎng)基 250g 用于*的分離培養(yǎng)
緩沖蛋白胨水（BPW） 250 用于沙門氏菌前增菌培養(yǎng)，亦可用于李氏菌前增菌培養(yǎng)（GB、SN標(biāo)準(zhǔn)）下面我們對細(xì)胞培養(yǎng)中常見的污染情況，做個總結(jié)：
1）原蟲：培養(yǎng)液可輕微渾濁，顯微鏡下那些細(xì)小的點狀物數(shù)量非常多，輕微活動，細(xì)胞雖然可以生長但繁殖速度卻明顯減慢，而且細(xì)胞狀態(tài)不好，邊緣不清楚，細(xì)胞不透亮。他們與細(xì)胞可共生但會與細(xì)胞爭奪營養(yǎng)。這種共生是非常普遍的，但他們的數(shù)量小，細(xì)胞站優(yōu)勢所以不會影響到細(xì)胞的正常生長，只有當(dāng)他們到達(dá)一定的數(shù)量時就會影響到細(xì)胞的生長，zui終形成惡性循環(huán)。
2）霉菌：培養(yǎng)液是清亮的，倒置顯微鏡下無雜質(zhì)，37度孵箱培養(yǎng)2-3天，仍清亮，但出現(xiàn)絮狀雜質(zhì)，鏡下可見呈細(xì)絲狀的團(tuán)狀漂浮物，可看到明顯的菌絲，細(xì)胞仍可生長，但時間長之后，細(xì)胞的活力狀態(tài)變差，用硫酸銅溶液擦拭CO2孵箱內(nèi)，再把水盤里也加上飽和量的硫酸銅?；蛘咴谂囵B(yǎng)箱的托盤加入飽和的消毒*高鹽液體,可以防止霉菌污染。CO2孵箱被霉菌污染后，可把所有細(xì)胞暫時轉(zhuǎn)移，采用過氧乙酸擦洗孵箱（包括隔板，箱壁）。并把過氧乙酸放置在孵箱內(nèi)一個小時，使其蒸汽彌漫。待過氧乙酸的氣味消散后，再移入細(xì)胞。孵箱應(yīng)定期清潔（2月左右），尤其在多雨的季節(jié)。其它培養(yǎng)箱清洗方法是：用84液擦洗－清水擦洗－75%酒精擦洗－紫外燈照。預(yù)防霉菌污染，可在培養(yǎng)基里加3u/ml的兩性霉素或*或*或雙抗；但細(xì)胞一旦污染，很難挽救，*或*或雙抗都于事無補(bǔ)，建議舍棄該污染細(xì)胞。，將環(huán)境*消毒，如果所有細(xì)胞都污染，可能是系統(tǒng)污染，檢查一下培養(yǎng)基和器材，如果只是個別污染，可能是操作問題，就要注意操作。
3）細(xì)菌：細(xì)菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細(xì)沙狀，根據(jù)感染細(xì)菌的不同，可有不同的外形，培養(yǎng)液一般會渾濁變黃，對細(xì)胞生長影響明顯。仔細(xì)檢查一下器皿的滅菌情況，是否在高壓滅菌時放氣時間足夠，壓力足夠！尤其是和儲存培養(yǎng)液接觸的移液管等物品，連續(xù)兩次污染的話有可能造成儲存液污染，一定要注意！下次使用前檢查一下培養(yǎng)液是否存在渾濁的現(xiàn)象！ 可在培養(yǎng)液中加相應(yīng)的抗生素處理
4）黑蛟蟲：可以穿透濾膜，也可以通過空氣傳播，低倍下為黑色點狀，高倍下可看見黑色的小蟲游來游去，培養(yǎng)液也是不渾的，一般不會太影響，細(xì)胞還是可以用的。常常是細(xì)胞生長狀態(tài)良好，且觀測到的運動物無明顯增多，且培養(yǎng)液顏色、透明度無明顯變化，可在同一批號的血清養(yǎng)的細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)類似現(xiàn)象。對細(xì)胞生長狀態(tài)不會有明顯影響，在細(xì)胞增殖旺盛之后會自然消失，除更換血清外無須特殊處理。建議如果細(xì)胞有可能是此種污染的話，可以增加細(xì)胞的種板密度，以提高細(xì)胞的生存率。
5）真菌：一般培養(yǎng)液清亮，不變色，鏡下有絲狀物，有些真菌開始很像死細(xì)胞碎片，只是它很多很多的小塊很清楚，象珊瑚狀，不象細(xì)胞碎片分不清，慢慢的會長出很細(xì)的黑色絲狀物。真菌生長的比較慢，不象細(xì)菌那么容易被發(fā)現(xiàn)，但是一旦發(fā)現(xiàn)有它的存在細(xì)胞就被污染了，也很難救活了。
6）支原體：黑色的，好象多為多形，培養(yǎng)液一般培養(yǎng)液一般會渾濁，原體感染，國內(nèi)血清很多都沒有做支原體陰性檢測，而支原體是牛血清中zui常見的微生物之一。而且它不能用過濾的辦法除去。支原體感染細(xì)胞以后，細(xì)胞病變不很明顯，只是慢慢死去。用泰樂菌素，獸用支原體病的藥，但可用于細(xì)胞培養(yǎng)，無任何不良反應(yīng)。Sigma公司的使用時用50ug/ml Tylosin培養(yǎng)液培養(yǎng)6天或連續(xù)傳兩代即可清除支原體污染。如果作為常用的抗生素的話, 建議用8ug/ml的濃度。
污染的可能原因：可能原因很多比如配液消毒問題、操作問題、環(huán)境問題等等關(guān)于培養(yǎng)基的無菌狀況，取培養(yǎng)基至培養(yǎng)瓶中（不加細(xì)胞），37度試培養(yǎng)一段時間后觀察。如果沒有細(xì)菌生長就是操作的問題。 也可以在培養(yǎng)基中事先加入雙抗（*和氨芐*）。但雙抗有時會影響細(xì)胞的狀態(tài)，所以在做轉(zhuǎn)染、檢測細(xì)胞某項指標(biāo)前一定要撤去雙抗，以避免影響實驗結(jié)果。1、孵箱應(yīng)定期用三氧機(jī)消毒或者 紫外光照射，并用酒精和新潔爾滅試擦孵箱同時孵箱內(nèi)的水應(yīng)是三蒸水2、超凈臺\取材\器材\培養(yǎng)液\培養(yǎng)瓶\操作等因素3、超凈臺的風(fēng)機(jī)不能過大，風(fēng)機(jī)到6-8格。否則也可能能致霉菌污染4、無菌室經(jīng)甲醛熏蒸消毒后，可用同等量的氨水噴灑中和，約幾小時即可進(jìn)入操作。
* A 1.25μg/支*5 添加于100ml HB0121中
1%亞碲酸鉀溶液 5ml*10 適量添加于HB0121
4-甲基傘形酮-D-葡萄糖醛酸苷（MUG） 0.1 添加于100ml HB02中用于大腸桿菌及0157檢定
mEC 肉湯 250g 用于0157選擇性增菌（USDA-FSIS方法）
mTSB肉湯 250g 用于0157選擇性增菌（ISO方法）
新生霉素A 2mg/支*5 添加于100ml mEC肉湯和mTSB肉湯中用于0157選擇性增菌
SD-39瓊脂 250g 用于濾膜法大腸桿菌0157的分離培養(yǎng)（NEOGEN方法
胰蛋白胨大豆肉湯 250 用于*的MPN測定，增菌培養(yǎng)，NaCl濃度可根據(jù)需要而調(diào)整（GB、SN標(biāo)準(zhǔn)）
Baird-Parker瓊脂基礎(chǔ) 250 用于*的選擇性分離培養(yǎng)（GB、SN標(biāo)準(zhǔn)）
亞碲酸鹽卵黃增菌液 5ml*10 加入Baird-Parker瓊脂基礎(chǔ)中
兔血漿 0.5ml*10 用于*凝固酶試驗
DNA酶瓊脂 100 用于核糖核酸酶檢測
7.5%氯化鈉肉湯 250 用于*的增菌培養(yǎng)（GB標(biāo)準(zhǔn)）
普通肉湯培養(yǎng)基 250 用于*的增菌培養(yǎng)（SN標(biāo)準(zhǔn)）
亞碲酸鈉肉湯培養(yǎng)基基礎(chǔ) 250 用于*的增菌培養(yǎng)。每100ml培養(yǎng)基需另加入1%亞碲酸鈉1ml
葡萄球菌增菌肉湯 250 用于凝固酶陽性葡萄球菌的選擇性增菌
葡萄球菌選擇性瓊脂 250 用于凝固酶陽性葡萄球菌的選擇性分離培養(yǎng)