小鼠艾氏腹水癌細胞 , EAC細胞5×10^5以上/1ml
對于大多數(shù)細胞研究工作者來說，小鼠艾氏腹水癌細胞 , EAC細胞污染那可是個糟糕的事情，也是比較容易出現(xiàn)的情況，我們如何防范，如何避免，是我們要學習和掌握的。
Restr.-Endonucl. Sma I, conc., 5,000 U （40 U/µl）
Restr.-Endonucl. Rsa I, conc. 5,000 U （40 U/µl）
Restr.-Endonucl. Bln I 200 U （10 U/µl）
Transcriptor cDNA Synth. Kit 1 1 kit （100 reactions）
小鼠艾氏腹水癌細胞 , EAC細胞Transcriptor cDNA Synth. Kit 2 1 kit （200 reactions）
Restr.-Endonucl. Eco RI, conc. 10,000 U （40 U/µl）
Restr.-Endonucl. Eco RI, conc. 50,000 U （40 U/µl）
Restr.-Endonucl. Pvu I, 100 U 100 U （5 U/µl）
Restr.-Endonucl. Cla I, 2500U 2,500 U （10 U/µl）
Restr.-Endonucl. Xba I, 1000 U 1,000 U （10 U/µl）
下面我們對細胞培養(yǎng)中常見的污染情況，做個總結：
1）原蟲：培養(yǎng)液可輕微渾濁，顯微鏡下那些細小的點狀物數(shù)量非常多，輕微活動，細胞雖然可以生長但繁殖速度卻明顯減慢，而且細胞狀態(tài)不好，邊緣不清楚，細胞不透亮。他們與細胞可共生但會與細胞爭奪營養(yǎng)。這種共生是非常普遍的，但他們的數(shù)量小，細胞站優(yōu)勢所以不會影響到細胞的正常生長，只有當他們到達一定的數(shù)量時就會影響到細胞的生長，zui終形成惡性循環(huán)。
2）霉菌：培養(yǎng)液是清亮的，倒置顯微鏡下無雜質，37度孵箱培養(yǎng)2-3天，仍清亮，但出現(xiàn)絮狀雜質，鏡下可見呈細絲狀的團狀漂浮物，可看到明顯的菌絲，細胞仍可生長，但時間長之后，細胞的活力狀態(tài)變差，用硫酸銅溶液擦拭CO2孵箱內，再把水盤里也加上飽和量的硫酸銅?；蛘咴谂囵B(yǎng)箱的托盤加入飽和的消毒*高鹽液體,可以防止霉菌污染。CO2孵箱被霉菌污染后，可把所有細胞暫時轉移，采用過氧乙酸擦洗孵箱（包括隔板，箱壁）。并把過氧乙酸放置在孵箱內一個小時，使其蒸汽彌漫。待過氧乙酸的氣味消散后，再移入細胞。孵箱應定期清潔（2月左右），尤其在多雨的季節(jié)。其它培養(yǎng)箱清洗方法是：用84液擦洗－清水擦洗－75%酒精擦洗－紫外燈照。預防霉菌污染，可在培養(yǎng)基里加3u/ml的兩性霉素或*或*或雙抗；但細胞一旦污染，很難挽救，*或*或雙抗都于事無補，建議舍棄該污染細胞。，將環(huán)境*消毒，如果所有細胞都污染，可能是系統(tǒng)污染，檢查一下培養(yǎng)基和器材，如果只是個別污染，可能是操作問題，就要注意操作。
3）細菌：細菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細沙狀，根據(jù)感染細菌的不同，可有不同的外形，培養(yǎng)液一般會渾濁變黃，對細胞生長影響明顯。仔細檢查一下器皿的滅菌情況，是否在高壓滅菌時放氣時間足夠，壓力足夠！尤其是和儲存培養(yǎng)液接觸的移液管等物品，連續(xù)兩次污染的話有可能造成儲存液污染，一定要注意！下次使用前檢查一下培養(yǎng)液是否存在渾濁的現(xiàn)象！ 可在培養(yǎng)液中加相應的抗生素處理
4）黑蛟蟲：可以穿透濾膜，也可以通過空氣傳播，低倍下為黑色點狀，高倍下可看見黑色的小蟲游來游去，培養(yǎng)液也是不渾的，一般不會太影響，細胞還是可以用的。常常是細胞生長狀態(tài)良好，且觀測到的運動物無明顯增多，且培養(yǎng)液顏色、透明度無明顯變化，可在同一批號的血清養(yǎng)的細胞中發(fā)現(xiàn)類似現(xiàn)象。對細胞生長狀態(tài)不會有明顯影響，在細胞增殖旺盛之后會自然消失，除更換血清外無須特殊處理。建議如果細胞有可能是此種污染的話，可以增加細胞的種板密度，以提高細胞的生存率。
5）真菌：一般培養(yǎng)液清亮，不變色，鏡下有絲狀物，有些真菌開始很像死細胞碎片，只是它很多很多的小塊很清楚，象珊瑚狀，不象細胞碎片分不清，慢慢的會長出很細的黑色絲狀物。真菌生長的比較慢，不象細菌那么容易被發(fā)現(xiàn)，但是一旦發(fā)現(xiàn)有它的存在細胞就被污染了，也很難救活了。
6）支原體：黑色的，好象多為多形，培養(yǎng)液一般培養(yǎng)液一般會渾濁，原體感染，國內血清很多都沒有做支原體陰性檢測，而支原體是牛血清中zui常見的微生物之一。而且它不能用過濾的辦法除去。支原體感染細胞以后，細胞病變不很明顯，只是慢慢死去。用泰樂菌素，獸用支原體病的藥，但可用于細胞培養(yǎng)，無任何不良反應。Sigma公司的使用時用50ug/ml Tylosin培養(yǎng)液培養(yǎng)6天或連續(xù)傳兩代即可清除支原體污染。如果作為常用的抗生素的話, 建議用8ug/ml的濃度。
污染的可能原因：可能原因很多比如配液消毒問題、操作問題、環(huán)境問題等等關于培養(yǎng)基的無菌狀況，取培養(yǎng)基至培養(yǎng)瓶中（不加細胞），37度試培養(yǎng)一段時間后觀察。如果沒有細菌生長就是操作的問題。 也可以在培養(yǎng)基中事先加入雙抗（*和氨芐*）。但雙抗有時會影響細胞的狀態(tài)，所以在做轉染、檢測細胞某項指標前一定要撤去雙抗，以避免影響實驗結果。1、孵箱應定期用三氧機消毒或者 紫外光照射，并用酒精和新潔爾滅試擦孵箱同時孵箱內的水應是三蒸水2、超凈臺\取材\器材\培養(yǎng)液\培養(yǎng)瓶\操作等因素3、超凈臺的風機不能過大，風機到6-8格。否則也可能能致霉菌污染4、無菌室經甲醛熏蒸消毒后，可用同等量的氨水噴灑中和，約幾小時即可進入操作。
Restr.-Endonucl. Dra I, 5000u 5,000 U （10 U/µl）
Restr.-Endonucl. Nhe I, 1000 u 1,000 U （10 U/µl）
Restr.-Endonucl. Not I, 200 u 200 U （10 U/µl）
cDNA Synthesis Kit 1 kit （for 10 reactions）
Restr.-Endonucl. Sex AI 200 U （10 U/µl）
Transcriptor HiFi cDNA Synth. 1 kit （200 reactions）
Restr.-Endonucl. Bgl II, 500U 500 U （10 U/µl）
Restr.-Endonucl. Sal I, 2500 U 2,500 U （10 U/µl）
Restr.-Endonucl. Pst I, 10 000 10,000 U （10 U/µl）
Restr.-Endonucl. Bam HI, 10000 10,000 U （10 U/µl）
Restr.-Endonucl. Sac I, 5000 U 5,000 U （10 U/µl）
Restr.-Endonucl. Hinf I, 1000 1,000 U （10 U/µl）
Restr.-Endonucl. Bam HI, conc. 10,000 U （40 U/µl）
Restr.-Endonucl. Pst I, conc., 10,000 U （40 U/µl）
Restr.-Endonucl. Sph I, 200 U 200 U （10 U/µl）
Restr.-Endonucl. Nde I, 1000 u 1,000 U （10 U/µl）
Restr.-Endonucl. Sal I, conc., 2,500 U （40 U/µl）
Restr.-Endonucl. Sac I, conc., 5,000 U （40 U/µl）
Restr.-Endonucl. Mro I 100 U （>=1 - 5 U/µl）
Restr.-Endonucl. Bst XI 1,250 U （10 U/µl）
Restr.-Endonucl. Bgl II, conc. 10,000 U （40 U/µl）
Restr.-Endonucl. Bam HI,conc. 50,000 U （40 U/µl）
Restr.-Endonucl. Hinf I, conc. 20,000 U （40 U/µl）
Restr.-Endonucl. Sfi I,conc 5,000 U （40 U/µl）
Hybridization Buffer 100 ml
Restr.-Endonucl. Sma I, 5000 U 5,000 U （10 U/µl）
Restr.-Endonucl. Xho I, conc., 2,500 U （40 U/µl）
Restr.-Endonucl. Rsa I, 5000 U 5,000 U （10 U/µl）
Restr.-Endonucl. Sca I, 2500 U 2,500 U （10 U/µl）
Restr.-Endonucl. Mae II 50 U （1 - 5 U/µl）