小鼠成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子ELISA試劑盒原理:
此法采用定量夾心酶聯(lián)免疫技術(shù)。抗體具體為FGF6已經(jīng)被預(yù)先涂到微孔板。標(biāo)準(zhǔn)和樣品吸入井和任何FGF6目前被綁定的固定化抗體。*共軛的抗體特異性FGF6除去任何未結(jié)合的物質(zhì)后,加入到孔中。抗*蛋白共軛的辣根過(guò)氧化物酶(HRP)的洗滌后,加入到孔中。經(jīng)過(guò)洗滌,以除去任何未結(jié)合的抗*蛋白的酶試劑,底物溶液加入到孔中,顯色成比例的量的初始步驟中的約束的FGF6。彩色顯影被停止并測(cè)量的顏色的強(qiáng)度。
小鼠成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(FGF6)ELISA試劑盒Specificty:
此法具有較高的靈敏度和特異性好,檢測(cè)鼠標(biāo)FGF6。觀察鼠標(biāo)FGF6和類(lèi)似物之間無(wú)顯著交叉反應(yīng)或干擾。
精度:
批內(nèi)精密度(內(nèi)檢測(cè)精度):CV%<8%
三種已知濃度的樣品進(jìn)行了測(cè)試20次在一個(gè)平板上進(jìn)行評(píng)估。
間精密度(精密檢測(cè)間):CV%<10%
已知的三個(gè)樣本20檢測(cè)到的濃度進(jìn)行了測(cè)試評(píng)估。
樣品采集和存儲(chǔ):
血清:使用血清分離管(SST)和全血標(biāo)本在室溫下兩小時(shí)或4℃過(guò)夜℃,然后離心15分鐘,在1000×g下。刪除上清即可檢測(cè),或分裝和店內(nèi)樣品在-20°C或-80°C。但應(yīng)避免反復(fù)凍融循環(huán)。
等離子:采集血漿中EDTA或肝素作為抗凝血?jiǎng)T?-8°C在30分鐘內(nèi)收集離心15分鐘,1000×G。即可檢測(cè),或分裝保存樣本在-20°C或-80°C。但應(yīng)避免反復(fù)凍融循環(huán)。
小鼠成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(FGF6)ELISA試劑盒檢測(cè)程序:
在使用前,將所有試劑和樣品室溫。再次離心樣品解凍后測(cè)定前。據(jù)建議,所有樣品和標(biāo)準(zhǔn)來(lái)測(cè)定一式兩份。
1。準(zhǔn)備好所有試劑,工作標(biāo)準(zhǔn)和樣品在前面的章節(jié)中。
2。請(qǐng)確定井?dāng)?shù)的使用,并把任何剩余的井和入袋干燥劑,密封保鮮袋,將未使用的井在4°C的含量布局表
。每孔加入100μl的標(biāo)準(zhǔn)和樣品。封面用膠粘帶提供。孵育2小時(shí),在37℃下一盤(pán)布局記錄標(biāo)準(zhǔn)和樣品檢測(cè)。
4。每孔中取出的液體,不洗。
5。向每孔中加入100μl*抗體(1倍)。蓋上一個(gè)新的膠粘帶。孵育1小時(shí),在37℃下(*抗體(1X)可能會(huì)出現(xiàn)混濁。預(yù)熱至室溫,輕輕混勻,直到出現(xiàn)均勻解決方案。)
6。吸液的各孔和洗滌,共洗滌三次重復(fù)該過(guò)程兩次。洗凈,每孔填充洗滌緩沖液(200μL)使用噴瓶,多道移液器,歧管器,或autowasher,和,靜置2分鐘,*清除液體的每一步是*的良好的性能。zui后一次洗滌后,清除任何剩余洗滌緩沖液的吸ordecanting。倒置板和涂抹對(duì)干凈的紙巾。
7。向每孔中加入100μl的HRP-抗*蛋白(1×)。量的微量滴定板,用一個(gè)新的粘接劑條。溫育1小時(shí),在37℃下
8。重復(fù)的愿望/洗滌過(guò)??程中,在步驟6的5倍。
9。將90μlTMB底物添加到每個(gè)孔中。孵育15-30分鐘,在37℃下避光
10。一站式解決方案,每孔加入底物,輕輕晃動(dòng)酶標(biāo)板,以確保充分混合。
11。在5分鐘內(nèi),設(shè)置至450nm,使用酶標(biāo)儀測(cè)定各孔的光密度。如果波長(zhǎng)校正,設(shè)置為540nm或570nm處。在540nm或570nm波長(zhǎng)在450nm處的讀數(shù)減去讀數(shù)。該減法校正板的光學(xué)缺陷。在450nm處未經(jīng)修正讀數(shù)直接,可能會(huì)比較高,不太準(zhǔn)確。
小鼠成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(FGF6)ELISA試劑盒計(jì)算結(jié)果:
建議使用專業(yè)的軟“曲線專家1.3"的標(biāo)準(zhǔn)曲線,這可以從我們的下載。
平均每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)和樣品的重復(fù)讀數(shù)和平均減去零標(biāo)準(zhǔn)的光學(xué)密度。
標(biāo)準(zhǔn)曲線,通過(guò)減少使用能產(chǎn)生四參數(shù)邏輯(4-PL)的曲線擬合的計(jì)算機(jī)軟件的數(shù)據(jù)。作為一種替代方法,建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,對(duì)在y-軸的濃度通過(guò)繪制在x-軸為每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的平均吸光度,并繪制一個(gè)通過(guò)在曲線圖上的點(diǎn)的*擬合曲線。該數(shù)據(jù)可以通過(guò)繪制的FGF6濃度與日志的OD值和*擬合直線的日志,可以通過(guò)回歸分析確定線性化。此過(guò)程會(huì)產(chǎn)生足夠的,但不太的適合的數(shù)據(jù)。