[器材和試劑]
● 9E10單抗（SantaCruzBiotech）
● PBS
● PBS／0．1％Tween 20（PBS／Tween）
● 4％MPBS
● 抗小鼠HRP標記抗體（例如Sigma目錄號A2554）
● 含有抗體片段的上清

[方法]
1．按每孔100pl蛋白抗原包被微量滴定板，4℃過夜。PBS中10ug／m1的濃度是包被抗原的標準濃度。但有時需要更高的濃度或者不同的包被緩沖液（比如碳酸鹽緩沖液）。
2．棄去抗原液并用PBS洗滌板孔2次。
3．加入200gl的2％MPBS封閉每個板孔，37℃孵育2小時。
4．用PBS洗滌板孔3次。
5．每孔加入50ul的4％MPBS。
6．每孔加入50ul含可溶性抗體的培養(yǎng)基上清，用移液器反復(fù)吹吸混勻，室溫孵育1小時。
7．棄去溶液，用PBS／Tween洗滌板孔3次，再用PBS洗滌3次。
8．每孔加入100ul 9E10單抗（用2％MPBS按1：1000稀釋）。室溫孵育孔板l小時。
9．棄去溶液，用PBS／Tween洗滌板孔3次，再用PBS洗滌3次。
10．每孔加入抗小鼠HRP（用2％MPBS按1：2000稀釋）。室溫孵育孔板1小時。
11．棄去二抗，并用PBS／Tween和PBS分別洗滌3次。
12．每孔加入100ul TMB系統(tǒng)溶液，并在暗處室溫孵育10～30分鐘。數(shù)分鐘內(nèi)，應(yīng)呈現(xiàn)藍色。
13．每孔加入50～100ul終止液，終止反應(yīng)。
14．在450nm處讀板。