Ibrahim等從M節(jié)段的高度保守的區(qū)域設(shè)計(jì)了兩對(duì)PCR引物用于RT-PCR和巢式RT—PCR，所擴(kuò)增的序列為G2糖蛋白基因的一部分。由于在GenBank中只能查到ZH—501和ZH—548M12毒株M節(jié)段的全序列，但是可以得到其他24株毒株的部分核苷酸序列；當(dāng)這些從26個(gè)不同的毒株中已知的核苷酸被比對(duì)時(shí)，從90—1711bp重疊部分有95．5％一100％的同源性，表明這一區(qū)域在RVFV里面是高度保守的。Battles等也已表明這一區(qū)域在來自不同宿主的6個(gè)非洲國家超過34年的收集到的22分離株間是高度保守的。盡管在這項(xiàng)研究中使用的引物只在一株裂谷熱病毒中被測(cè)試，Ibrahim等預(yù)言這些引物如果不是全部但也可

能擴(kuò)增大部分RFV病毒株，因?yàn)檫@些引物是在高度保守的區(qū)域內(nèi)選取的。另一方面，這些引物同非裂谷熱的其他白蛉熱病毒序列的同源性較低，暗示了同其他白蛉熱病毒應(yīng)該沒有交叉反應(yīng)性。

 

    Sall等在RVFV的S節(jié)段設(shè)計(jì)了保守的寡核苷酸引物，建立了一管巢式RT-PCR方法，當(dāng)RVRV人為地用人正常血清進(jìn)行系列稀釋時(shí)，使用簡(jiǎn)單的RT-PCR和巢式RT-PCR分別可以檢測(cè)到小50個(gè)PFU和0．5個(gè)PFU。RT-PCR方法對(duì)于檢測(cè)試驗(yàn)感染的小鼠和駱駝的血中的裂谷熱病毒RNA是有效的，并且發(fā)現(xiàn)巢式RT-PCR比病毒分離方法更為靈敏。這一方法被成功地運(yùn)用于1998年毛里塔尼亞暴發(fā)時(shí)人的病例的檢測(cè)。同時(shí)作者指出，血清學(xué)方法（1sM和IgG捕獲ELISA）在用于病毒感染晚期收集的樣品的檢測(cè)時(shí)是適當(dāng)?shù)?；而?yīng)用早期樣品進(jìn)行診斷時(shí)，RT-PCR或者病毒分離是應(yīng)當(dāng)?shù)?。?dāng)此方法同IgG抗體檢測(cè)相結(jié)合時(shí)，與病毒分離（Ⅵ）方法的符合率可以達(dá)到100％，可以與IgG檢測(cè)結(jié)合被作為RFV早期疑似病例的常規(guī)檢測(cè)方法。

 

    Espach等也建立了一管法RT-PCR方法檢測(cè)早期血清或者血液樣品中的RVFV，擴(kuò)增序列位于病毒的M節(jié)段的糖蛋白基因，檢測(cè)靈敏度比Sail等所建立的巢式RT-PCR方法高，可以達(dá)到0．25 TCID5。，相當(dāng)于0．17PFU。

 

    非常值得注意的是試驗(yàn)的靈敏度依賴于幾個(gè)因素，如樣品來源、核酸提取方法、RT—PCR擴(kuò)增和熱循環(huán)條件等，在不同的實(shí)驗(yàn)室使用的條件可能都需要優(yōu)化。例如從蚊子中提取裂谷熱病毒RNA的方法，盡管可能在25只或50只感染的蚊子當(dāng)中檢測(cè)一個(gè)感染的蚊子（只有當(dāng)RNA樣品用酚：三氯甲烷重新提取，并且用異丙醇重沉淀時(shí)），使用10只或者更少的蚊子群體避免了RT-PCR抑制劑，但是如果使用更多的蚊子樣品，可能需要增加酚；三氯甲烷或改變RNA提取程序。

 

    Real-timePCR方法 Garcia等首先運(yùn)用Real—time PCR中的TaqMan技術(shù)建立了檢測(cè)RVFV的方法，目的片段位于NSs區(qū)域。使用從含有目的基因的質(zhì)粒體外轉(zhuǎn)錄合成的RNA建立了標(biāo)準(zhǔn)曲線，Real-timeRT-PCR用從感染的Vero細(xì)胞得來的RVFV進(jìn)行了評(píng)估，發(fā)現(xiàn)這一方法對(duì)RVFV是特異的，并且被成功地運(yùn)用于感染了RVFV的動(dòng)物血清樣品中病毒基因組的檢測(cè)，靈敏度為可以檢測(cè)到50—100個(gè)拷貝（用人工合成的RNA進(jìn)行評(píng)估）和10 TCIDs。每毫升的病毒量；并且運(yùn)用此方法評(píng)估了抗病毒藥物的抗病毒效果。另外，Drosten等也建立了能夠鑒別病毒性出血熱相似癥狀的幾種不同病毒的Real-timePCR方法，其中包括使用Taq—Man技術(shù)檢測(cè)RVFV，所設(shè)計(jì)的目的擴(kuò)增片段位于G2基因。Real-timePCR作為一項(xiàng)RVF早期確診和隨后的抗病毒治療評(píng)價(jià)的常規(guī)檢測(cè)方法將十分有用。