在獸醫(yī)臨診或?qū)嶒炛?，需做分離鑒定的大腸桿菌多限于一些對畜禽有致病性的菌株，如引起初生幼畜（仔豬、犢牛、羔羊）兼或斷奶豬腹瀉的ETEC菌株、致豬水腫病和幼兔腹瀉以及雞各種大腸桿菌感染癥的病原性菌株。除對分離菌做生物化學(xué)分型鑒定和血清學(xué)分型鑒定外，還應(yīng)包括對ETEC黏附素抗原和腸毒素的鑒定，對水腫病菌株的SLT-Ⅱ有條件時也可以進(jìn)行測定。至于對雞、兔和豬水腫病的菌株的菌毛鑒定且前尚處于實驗室研究階段。
1．形態(tài)和培養(yǎng)特征
致水腫病和新生仔豬腹瀉的大多數(shù)菌株可呈溶血，在麥康凱瓊脂上形成紅色菌落，伊紅美藍(lán)瓊脂上為中心暗藍(lán)黑色并有綠色金屬閃光的菌落。
2．生化鑒定
凡被檢菌落的細(xì)菌在三糖鐵瓊脂（TST）的反應(yīng)為陽性者，在O抗原鑒定為陽性或與此同時進(jìn)行常規(guī)生化項目鑒定亦符合埃希菌屬的生化特性后，方可繼續(xù)作進(jìn)一步血清學(xué)定型和毒性因子測定。
已知有97％分離出的大腸桿菌產(chǎn)生葡萄糖苷酸酶，此酶能使葡萄糖苷酸-4-甲基傘形花烯（MUG）分解而生成熒光性甲基傘形花酮，可用作快速檢測。Thompson（1990）的快速法可于2Omin內(nèi)完成。將應(yīng)試大腸桿菌培養(yǎng)于哥倫比亞瓊脂基礎(chǔ)（Oxoid，含5％的綿羊血），在36℃孵育18-24h。
MUG試劑：4-甲基傘形花烯寸-D葡萄糖苷酸1OOmg，蒸餾水1OOml，三通（TritoxX-1OO）2滴，待*溶化，用O．45tzm孑L徑濾膜行濾過滅菌，儲于無菌玻瓶內(nèi)，在冰箱中可保存6月。在冰箱中溶液清澄，在室溫中微濁。
試驗：用6mmX 5Omm試管作培養(yǎng)。滴2-3滴（約0．5m1）MUG試劑于試管中，加熱到室溫，用一無菌接種棒刮下一部分純培養(yǎng)物在MUG試劑中乳化，使呈乳樣懸劑。在44．5℃水浴中孵育2Omin，此溫度可產(chǎn)生強反應(yīng)；但在22～44．5℃之間均可有滿意的反應(yīng)。次用高強度長波長（366nm）紫外線燈在暗室內(nèi)檢視，置試管于光源下15cm處，易于觀察。陽性者發(fā)出青色熒光。
同樣原理，葡萄糖苷酸亦可和其他各種產(chǎn)熒光性試劑結(jié)合，供檢測葡萄糖苷酶酸酶。
3．血清型鑒定
大腸桿菌目前有164個O抗原（O1～O171）、72個K抗原（K1～K1O3）和55個H抗原（H1～H57），已發(fā)現(xiàn)的血清型至少有幾千種。因此，該菌的血清型鑒定是以O(shè)抗原、K抗原、H抗原三種抗原作為基礎(chǔ)的，對ETEC菌株還必須增做黏附素抗原的鑒定。鑒于ETEC和EPEC均常局限于少數(shù)O抗原群，且前者的O抗原群又與黏附素及腸毒素之間存在一定的相關(guān)性。
因此通常對動物ETEC和豬水腫病及禽大腸桿菌病的菌株可先確定其O抗原型，然后做*的血清型鑒定。鑒定O抗原的抗血清必須用單因子抗（）血清，以免發(fā)生交叉反應(yīng)。若使用非單因子血清應(yīng)以試管凝集的反應(yīng)結(jié)果來判定。
4。ETEC毒力因子的鑒定
和幼畜腹瀉有關(guān)的大腸桿菌分離物在上述生化和血清型（至少是O抗原）鑒定證實為本菌后，再鑒定其是否具有黏附素抗原和腸毒素。對腸毒素的鑒定可根據(jù)黏附素與腸毒素關(guān)系選擇適當(dāng)?shù)姆椒āＭǔ?，牛、羊源菌原只產(chǎn)ST，而豬源菌株多產(chǎn)LT和ST。鑒定黏附素的方法很多，一般實驗室多用玻板凝集試驗、熒光抗體技術(shù)、ELISA和MRHA及其抑制試驗等方法。鑒定腸毒素的方法常用的為兔回腸結(jié)扎試驗或仔豬小腸結(jié)扎試驗、兔皮膚藍(lán)斑試驗以及平板免疫溶血試驗等。對ST的動物試驗只有乳鼠胃內(nèi)投服試驗可用。豬水腫病菌株的SLT-Ⅱ的鑒定目前仍以Vero細(xì)胞測定法為主。
