ELISA法檢測(cè)絲蟲抗體

時(shí)間：2012/10/12閱讀：364

絲蟲?。╢ilariasis）在我國(guó)是由斑氏和馬來(lái)絲蟲寄生于人體淋巴系統(tǒng)所引起的慢性寄生蟲病，通過(guò)蚊蟲傳播。早期臨床特征主要為淋巴管炎和淋巴結(jié)炎，晚期為淋巴管阻塞形成象皮腫。常用的檢查方法是用ELISA

法檢測(cè)絲蟲抗體。

[檢測(cè)方法] ELISA法

[方法學(xué)原理] 將微絲蚴固定在玻片上制成固相抗原片，加入待檢血清和酶標(biāo)記抗體后，若待檢血清中存在相應(yīng)抗體，則形成的抗原抗體復(fù)合物附著在玻片上。加入相應(yīng)底物后顯色，在顯微鏡下進(jìn)行觀察。

[標(biāo)本準(zhǔn)備] 不抗凝靜脈血2ml。

[試劑]

1．微絲蚴固相抗原片

2．底物溶液

3．0．2mol／LpH7．6硼酸緩沖液

4．HRP-抗人IgG

5．洗滌液與稀釋液

[檢測(cè)步驟]

1．于抗原點(diǎn)片上滴加1：40和1：80稀釋的待檢血清，在37C環(huán)境中濕盒2h。

2．流水沖去多余血清后于洗滌液中浸洗3次，每次5min。

3．滴加適濃度HRP-抗人IgG，在37℃環(huán)境中濕盒1h。

4．流水沖去多余血清后于洗滌液中浸洗3次，每次5min。

5．滴加底物1滴于低倍顯微鏡下觀察。

[結(jié)果觀察] 觀察200條微絲蚴，反應(yīng)結(jié)果判定如下。

3+ >95％微絲蚴呈棕色或橙色；

2+ ≥50％微絲蚴呈棕色或橙色；

1+ ≥5％微絲蚴呈棕色、橙色或淺棕色；

± <5％微絲蚴呈淺棕色或橙色；

一微絲蚴無(wú)色或稍呈淺黃色。

凡血清1：40和1：80均為陽(yáng)性反應(yīng)（+一+++）者，定為陽(yáng)性；1：40為“+”或“土”，定為可疑；1：40為“-”者定為陰性。

[參考范圍] 絲蟲抗體陰性

[注意事項(xiàng)]

1．試驗(yàn)前試劑應(yīng)在室溫環(huán)境中平衡30min。

2．洗滌時(shí)應(yīng)注意不能將玻片上的固相抗原沖掉。

[臨床意義] 絲蟲病潛伏期4個(gè)月至15年，平均1年左右。流行區(qū)可有50％-75％的“無(wú)癥狀”感染者。ELISA法檢測(cè)絲蟲抗體陽(yáng)性可對(duì)該病進(jìn)行確診，陰性不能排除絲蟲病感染。

1．急性期突出癥狀為淋巴結(jié)炎、淋巴管炎、精囊炎、絲蟲熱等。

2．慢性期由于炎癥反復(fù)發(fā)作，使淋巴管和淋巴結(jié)因增生的肉芽組織阻塞，出現(xiàn)*的臨床癥狀和體征。

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