噬菌體制備及定量的一般實(shí)驗(yàn)方案

時(shí)間：2012/9/22閱讀：326

大部分噬菌體展示方案都涉及這樣一個(gè)基本步驟：從被感染的細(xì)菌中制備噬菌體或噬菌粒顆粒的儲(chǔ)液（增殖），并滴定這些儲(chǔ)液以測(cè)定有感染力的顆粒的濃度。對(duì)于噬菌體載體（以及輔助噬菌體），對(duì)于噬菌體載體（以及輔助噬菌體），要通過計(jì)數(shù)宿主菌菌苔上的噬菌體斑來測(cè)定這些可變顆粒的濃度。為了確保能得到一個(gè)能繁殖的噬菌體的純培養(yǎng)物，任何時(shí)候增殖噬菌體載體或輔助噬菌體，按照這個(gè)步驟來進(jìn)行噬菌斑的分離都是可取的。

對(duì)于噬菌粒載體，噬菌粒的滴定涉及對(duì)細(xì)菌的感染，以及對(duì)得到的抗生素耐受性的克隆的計(jì)數(shù)。

測(cè)定噬菌體或噬菌粒制備產(chǎn)物感染力的一個(gè)簡(jiǎn)便的替代方案是通過吸光度評(píng)估濃度。消光系數(shù)（extinctioncoefficient）取決于噬菌體顆粒的大小，而噬菌體顆粒的大小又取決于基因組的大小。一般而言，對(duì)于一個(gè)輔助噬菌體如VCSMl3，lOD₂₇₀=1．1X10¹³個(gè)顆粒／m1。但基于吸光度的計(jì)算可能對(duì)能繁殖的、有感染力的顆粒的濃度評(píng)估過高。

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噬菌體制備及定量的一般實(shí)驗(yàn)方案

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