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新品上市|核酸質(zhì)譜預(yù)處理試劑UNG體系
閱讀：123發(fā)布時間：2023-7-21
PCR檢測因其高靈敏度、快速、操作便捷等優(yōu)勢已經(jīng)被廣泛應(yīng)用，不過正是由于它靈敏度極-高，少量的外源DNA污染即可與目的模板一起擴(kuò)增，從而導(dǎo)致檢測結(jié)果的假陽性。污染很容易發(fā)生，比如模板交叉污染、PCR試劑污染、PCR擴(kuò)增產(chǎn)物污染(主要以氣溶膠形式污染)以及實驗室克隆質(zhì)粒污染等，這幾種情況中最-為嚴(yán)重的是擴(kuò)增產(chǎn)物污染。為保證PCR結(jié)果的準(zhǔn)確性，我們會引入UNG(也稱為UDG，Uracil-DNA Glycocasylase，以下簡稱為UNG酶)酶防污染體系。
UNG（Uracil-DNA Glycosylase）是一種酶，其作用是識別和修復(fù)DNA中的尿-嘧-啶（U）殘基。UNG主要參與DNA修復(fù)過程中的堿基切除修復(fù)機(jī)制。
PCR反應(yīng)前，在一定條件下，UNG酶催化水解含有dU-DNA鏈中的尿-嘧-啶堿基和糖磷酸骨架的N-糖苷鍵，產(chǎn)生的缺嘧啶位點(diǎn)，釋放游離尿-嘧-啶。然后進(jìn)行熱處理，使UNG酶失活。同時，高溫使得缺嘧啶位點(diǎn)的磷酸骨架極易水解斷裂，從而消除含有尿-嘧-啶的PCR產(chǎn)物的污染(如下圖所示)。
飛行時間質(zhì)譜分析系統(tǒng)核酸樣本預(yù)處理試劑GR（含UNG）（貨號：T400301）是一款具有強(qiáng)防污染能力、高質(zhì)譜兼容性的試劑產(chǎn)品，由UNG酶體系、多重PCR反應(yīng)體系、去磷酸反應(yīng)體系和單堿基延伸反應(yīng)體系等組成。該產(chǎn)品基于核酸質(zhì)譜平臺可對多種類型DNA樣本的核酸預(yù)處理，并能高效應(yīng)用于藥物基因組學(xué)研究、遺傳病診斷、病原體檢測等領(lǐng)域，滿足不同的研究需求。
本產(chǎn)品運(yùn)用dUTP-UNG防污染系統(tǒng)，可有效去除PCR產(chǎn)物的殘留污染，大大降低了由于擴(kuò)增產(chǎn)物污染而導(dǎo)致的假陽性。UNG酶在PCR循環(huán)中的預(yù)變性步驟即可被滅活，因此不會影響新的PCR產(chǎn)物的形成。該產(chǎn)品為飛行時間質(zhì)譜分析系統(tǒng)的核酸樣本預(yù)處理提供了高效、可靠的解決方案，減少假陽性發(fā)生率，保證質(zhì)譜分析結(jié)果的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性。
圖１. UNG酶體系對100 ng含dU DNA底物和不含dU DNA底物的消化情況電泳結(jié)果圖
UNG酶體系在經(jīng)過50℃ 10 min孵育后，含dU的DNA底物組的PCR條帶基本消除，而不含dU的DNA底物組條帶亮明亮。我們的UNG酶體系能夠有效降解含dU的DNA底物。
２.能夠顯著降低核酸質(zhì)譜的污染風(fēng)險
圖２. UNG-PCR體系與普通PCR體系對某SNP Panel污染去除能力測試的質(zhì)譜結(jié)果對比圖
UNG-PCR體系與普通PCR體系對某SNP Pane測試的結(jié)果相比，UNG-PCR體系能明顯降低dU DNA帶來的污染。我們的UNG酶體系在核酸質(zhì)譜法中能夠顯著降低核酸質(zhì)譜的污染風(fēng)險，充分實驗數(shù)據(jù)驗證污染去除率可達(dá)95%。
圖3. UNG酶體系、無UNG酶體系對同一樣本擴(kuò)增后的電泳結(jié)果圖
UNG酶體系在經(jīng)過50℃ 10 min孵育后再進(jìn)行PCR反應(yīng)，未出現(xiàn)明顯條帶亮度減弱、未出現(xiàn)明顯雜帶。我們的UNG酶體系能夠保持PCR產(chǎn)物的完整性。
圖４. UNG-PCR體系與普通PCR體系對某SNP Panel測試的質(zhì)譜結(jié)果對比圖
UNG-PCR體系與普通PCR體系對某SNP Panel測試的結(jié)果相當(dāng)，基因型一致且評分未出現(xiàn)明顯差距。我們的UNG酶體系能夠保持核酸質(zhì)譜檢測的正確性。
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