商品介紹：

細胞凍存注意事項：
(1)  細胞的收獲
用來凍存的細胞一般選擇在細胞約鋪滿 90% 的時候，這時細胞生長狀態(tài)好，細胞數(shù)量也多，并且在收獲細胞前 24 小時換一次培養(yǎng)液。收獲用來凍存的細胞開始時方法和平時一樣，用 100xg 離心 5 分鐘收集細胞再重懸，活細胞記數(shù)。稀釋或濃縮到細胞保存的最終細胞濃度的二倍(一般是 400-1000 萬 細胞 /ml )，加入已經(jīng)配好的等體積的培養(yǎng)液保護劑混合溶液中輕輕混勻，分裝到凍存管，冷凍保存。
(2)  保護劑的使用
細胞凍存中， 一般使用DMSO 作為保護劑。在細胞凍存中， DMSO 使用的最終濃度一般是 5-15% ，某種具體細胞的凍存液中的DMSO濃度可以從ATCC查到。對特別敏感的細胞特別是雜交瘤細胞在凍存時使用 95% 血清和 5%DMSO 可能會好些。保護劑在使用時先用培養(yǎng)液或血清配成最終濃度的2倍，再與等體積的懸浮細胞的培養(yǎng)液混合。
(3)  細胞凍存的速率
細胞的冷凍速率最適控制在讓細胞有足夠的時間脫水而又不被過度脫水導致細胞損害。對大多數(shù)細胞來說，每分鐘降 1 至 3 ℃是合適的。通常的操作是把細胞先在-20℃1-2個小時，再放入 -80℃冰箱過夜(如果沒有-80℃冰箱，可以用干冰替代)，再轉入液氮罐或低于 -130℃的冰箱長期保存。
(4)  儲存環(huán)境
細胞長期保存溫度是 -130 ℃或更低。液氮罐中氣態(tài)層溫度在 -140℃至 -180℃之間，細胞可保存在氣態(tài)層或浸入液氮中，如果可能最好保存在氣態(tài)層，因為這樣可避免由于有液氮進入凍存管而在拿出細胞時引起爆炸(但是這樣液氮罐內只能存儲少量液氮，需要經(jīng)常添加)。細胞也可以在-80℃冰箱保存幾個月左右的時間。

公司正在出售的產(chǎn)品：

9號染色體開放閱讀框59抗體  鉀離子通道多聚體結構域蛋白15抗體　英文名；KCTD15

Ⅲ型膠原蛋白/膠原蛋白3/3型膠原蛋白抗體  間隙連接蛋白26/GJB2抗體　英文名；Connexin 26

ADCK4蛋白抗體  減數(shù)分裂同源蛋白DMC1抗體　英文名；DMC1

AF488標記人CD105單克隆抗體  堿性磷酸酶重組兔單克隆抗體　英文名；Alkaline phosphatase, tissue-nonspecific isozyme

AF647標記的腫瘤壞死因子抗體  膠原三股螺旋重復蛋白1抗體　英文名；CTHRC1

AF680標記的白介素1β抗體  角質蛋白α抗體　英文名；SPRR1a

11號染色體開放閱讀框46抗體  核因子κB抑制蛋白樣蛋白2抗體　英文名；NFKBIL2

14-3-3 sigma 重組鼠單克隆抗體  黑皮質素-1受體抗體　英文名；MC1R

16號染色體開放閱讀框57抗體  黑色素瘤相關抗原C1抗體　英文名；MAGEC1

19號染色體開放閱讀框21抗體  環(huán)指蛋白1抗體　英文名；RING1

MDA-MB-436人乳腺癌細胞19號染色體開放閱讀框80單克隆抗體  環(huán)指蛋白59抗體　英文名；RNF59/MID1

1號染色體開放閱讀框156抗體  黃熱病毒包膜糖蛋白抗體　英文名；Yellow fever virus envelope glycoprotein E

1號染色體開放閱讀框220抗體  活化誘導分子CD69抗體　英文名；CD69

操作步驟:

(1) 細胞系培養(yǎng)：取6cm細胞皿，向每孔中加入2mL含1~2×105個細胞培養(yǎng)液，37℃ CO2培養(yǎng)密度至40%~60%，密度過大，轉染后不利篩選細胞。

(2) 轉染液制備：在EP管中制備以下兩液(為轉染每一個孔細胞所用的量)

A液：用不含血清培養(yǎng)基稀釋1ug 質粒DNA。

B液：用不含血清培養(yǎng)基稀釋2ul脂質體。

分別將A液與B液輕彈混勻，靜置5分鐘。

(3) 吸取B液加入至A液中，輕彈混勻。室溫中置10-15分鐘。

(4) 轉染準備：用1mL不含血清培養(yǎng)液漂洗兩次，再加入4mL不含血清培養(yǎng)液。

(5) 轉染：把A/B復合物緩緩加入培養(yǎng)液中，搖勻，37℃溫箱置6~24小時，吸除無血清轉染液，換入正常培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。

(6) 瞬時轉染后，可在48h-72h細胞長滿之后，提取細胞蛋白或者RNA，驗證敲減/過表達效率。