13524666654
當前位置：上海撫生實業(yè)有限公司>>細胞生物學試劑>>細胞凋亡與增殖>> 細胞增殖示蹤熒光探針(CFDA SE)
| 貨號 | FS-X9548 |
|---|
中文名稱：細胞增殖示蹤熒光探針(CFDA SE)
英文名稱：Cell proliferation tracer fluorescence probe
產(chǎn)品規(guī)格：5mg
貨號：FS-X9548
本品是一種近年來被廣泛應用的細胞增殖檢測用熒光探針，也可以用于細胞的熒光示蹤。基于CFDA SE熒光標記的細胞增殖檢測和[3H]-thymidine摻入、BrdU標記獲得的檢測結(jié)果*一致，但同時可以提供更多的細胞增殖信息。使用CFDA SE檢測可以提供整個細胞群中有多少比例的細胞分裂了1次、2次或更多次數(shù)，同時如果和其它熒光探針聯(lián)用，可以獲取不同分裂次數(shù)細胞的其它相關(guān)信息。
產(chǎn)品介紹:
：150347-59-4 分子式：C29H19NO11 分子量：557.47 CFDA SE可以通透細胞膜，進入細胞后可以被細胞內(nèi)的酯酶(esterase)催化分解成CFSE，CFSE可以偶發(fā)性地(spontaneously)并不可逆地和細胞內(nèi)蛋白的Lysine殘基或其它氨基發(fā)生結(jié)合反應，并標記這些蛋白。在加入熒光探針CFDA SE后大約24小時，即可充分標記細胞。被CFDA SE標記的非分裂細胞的熒光非常穩(wěn)定，穩(wěn)定標記的時間可達數(shù)個月。CFDA SE標記細胞的熒光非常均一，比以前使用的其它細胞示蹤熒光探針例如PKH26的熒光更加均一，并且 分裂后的子代細胞的熒光分配也更均勻。 由于CFDA SE標記細胞的熒光非常均勻和穩(wěn)定，每分裂一次子代細胞的熒光會減弱一半，這樣通過流式細胞儀檢測就可以檢測出沒有分裂的細胞，分裂一次的細胞(1/2的熒光強度)，分離兩次的細胞(1/4的熒光強度)，分裂三次的細胞(1/8的熒光強度)以及類似的其它分裂次數(shù)的細胞。采用CFDA SE通過流式細胞儀檢測獲得的檢測結(jié)果參考右圖。每一個峰代表一種分裂次數(shù)的細胞，從右至左的峰通常依次為分裂0次、1次、2次、3次等次數(shù)的細胞。分裂次數(shù)較多后，分裂0次或1次等沒有分裂或分裂次數(shù)較少的細胞會逐漸減少直至檢測不到。 使用CFDA SE可以檢測分裂多達8次或更多次數(shù)的細胞增殖。目前CFDA SE標記細胞后通常用流式細胞儀進行細胞增殖檢測。常用于淋巴細胞的增殖檢測，也可以用于成纖維細胞、NK細胞等其它細胞的增殖檢測，甚至還可以用于細菌增殖的檢測。 CFDA SE標記細胞呈綠色熒光，檢測時的激發(fā)波長可以選擇488nm，此時的發(fā)射波長為518nm，使用流式細胞儀檢測時可以采用FL1 detection channel。CFDA SE標記的細胞也可以用熒光顯微鏡進行觀察。 CFDA SE標記的細胞無論在體外還是體內(nèi)都不會使鄰近細胞染色。即CFDA SE熒光探針完成標記后不會從一個細胞轉(zhuǎn)移到鄰近細胞。CFDA SE標記細胞僅需5-15分鐘即可完成。對于不同細胞，佳標記時間需自行摸索。 CFDA SE可以使用無水DMSO(anhydrous DMSO)配制，配制濃度通常為2-10mM。配制好的溶液宜當天使用完畢，不宜長時間保存。CFDA SE標記細胞時的終濃度通常為0.2-10μM或更高一些。在工作濃度為5μM時，一個包裝的本產(chǎn)品共可以標記約1.8升的細胞。 儲存條件：-20℃，有效期6個月。 |
培養(yǎng)操作步驟：
1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)： 1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??； 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置； 3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化； 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)； 5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)； | 二、免疫熒光鑒定： 1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min； 2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min； 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜； 5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h； 6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結(jié)果分析
a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
突觸融合蛋白2(STX2)檢測試劑盒 forSyntaxin2(STX2)
巖藻糖基轉(zhuǎn)移mei8(FUT8)檢測試劑盒 forFucosyltransferase8(FUT8)
生長抑su(SST)檢測試劑盒 forSomatostatin(SST)
解整合su金屬蛋白mei9(ADAM9)檢測試劑盒 forADisintegrinAndMetalloprotease9(ADAM9)
N-jia基-D-天氡氨suan離子能谷氨suan受體1(GRIN1)檢測試劑盒 forGlutamateReceptor,Ionotropic,N-Methyl-D-Aspartate1(GRIN1)
線粒體乙醛脫氫mei(ALDM)檢測試劑盒 forAldehydeDehydrogenase,Mitochondrial(ALDM)
細胞周期suY(CCNY)檢測試劑盒 forCyclinY(CCNY)
AMPA離子能谷氨suan受體3(GRIA3)檢測試劑盒 forGlutamateReceptor,Ionotropic,AMPA3(GRIA3)
磷脂酰肌chun特異性磷酯meiCβ1(PLCβ1)檢測試劑盒 forPhospholipaseCBeta1,PhosphoinositideSpecific(PLCb1)
白介su1β(IL1β)檢測試劑盒 forInterleukin1Beta(IL1b)
凋亡相關(guān)因子配體(FASL)檢測試劑盒 forFactorRelatedApoptosisLigand(FASL)
jia狀旁腺激su(PTH)檢測試劑盒 forParathyroidHormone(PTH)
激肽釋放mei3(KLK3)檢測試劑盒 forKallikrein3(KLK3)
淋巴細胞抗原96(LY96)檢測試劑盒 forLymphocyteAntigen96(LY96)
蛋白mei體亞基α1(PSMα1)檢測試劑盒 forProteasomeSubunitAlphaType1(PSMa1)
橋粒芯糖蛋白4(DSG4)檢測試劑盒 forDesmoglein4(DSG4)
血小板因子4V1(PF4V1)檢測試劑盒 forPlateletFactor4Variant1(PF4V1)
細胞增殖示蹤熒光探針(CFDA SE)ben芴chun標準品 規(guī)格:100mg 英文名稱：Lumefantrine
環(huán)磷酰an相關(guān)物質(zhì)A標準品 規(guī)格:25mg 英文名稱：
fu康zuo相關(guān)物質(zhì)B標準品 規(guī)格:10mg 英文名稱：
標準品 規(guī)格:200mg 英文名稱：Warfarin
三正丁基氧化磷標準品 規(guī)格:25mg 英文名稱：Tributyl Phosphine Oxide
卡麥角林標準品 規(guī)格:125mg 英文名稱：Cabergoline
鹽suan阿夫zuo嗪標準品 規(guī)格:150mg 英文名稱：Alfuzosin Hydrochloride
枸櫞suan鉍標準品 規(guī)格:100mg 英文名稱：Bismuth Citrate
番瀉A標準品 規(guī)格:20mg 英文名稱：Sennoside A
膽suan標準品 規(guī)格:2g 英文名稱：Cholic Acid (AS)
請輸入賬號
請輸入密碼
請輸驗證碼
以上信息由企業(yè)自行提供，信息內(nèi)容的真實性、準確性和合法性由相關(guān)企業(yè)負責，儀表網(wǎng)對此不承擔任何保證責任。
溫馨提示：為規(guī)避購買風險，建議您在購買產(chǎn)品前務必確認供應商資質(zhì)及產(chǎn)品質(zhì)量。
儀表網(wǎng)