操作步驟:

(1) 細(xì)胞系培養(yǎng)：取6cm細(xì)胞皿，向每孔中加入2mL含1~2×105個細(xì)胞培養(yǎng)液，37℃ CO2培養(yǎng)密度至40%~60%，密度過大，轉(zhuǎn)染后不利篩選細(xì)胞。

(2) 轉(zhuǎn)染液制備：在EP管中制備以下兩液(為轉(zhuǎn)染每一個孔細(xì)胞所用的量)

A液：用不含血清培養(yǎng)基稀釋1ug 質(zhì)粒DNA。

B液：用不含血清培養(yǎng)基稀釋2ul脂質(zhì)體。

分別將A液與B液輕彈混勻，靜置5分鐘。

(3) 吸取B液加入至A液中，輕彈混勻。室溫中置10-15分鐘。

(4) 轉(zhuǎn)染準(zhǔn)備：用1mL不含血清培養(yǎng)液漂洗兩次，再加入4mL不含血清培養(yǎng)液。

(5) 轉(zhuǎn)染：把A/B復(fù)合物緩緩加入培養(yǎng)液中，搖勻，37℃溫箱置6~24小時，吸除無血清轉(zhuǎn)染液，換入正常培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。

(6) 瞬時轉(zhuǎn)染后，可在48h-72h細(xì)胞長滿之后，提取細(xì)胞蛋白或者RNA，驗證敲減/過表達效率。

商品介紹：

細(xì)胞凍存注意事項：
(1)  細(xì)胞的收獲
用來凍存的細(xì)胞一般選擇在細(xì)胞約鋪滿 90% 的時候，這時細(xì)胞生長狀態(tài)好，細(xì)胞數(shù)量也多，并且在收獲細(xì)胞前 24 小時換一次培養(yǎng)液。收獲用來凍存的細(xì)胞開始時方法和平時一樣，用 100xg 離心 5 分鐘收集細(xì)胞再重懸，活細(xì)胞記數(shù)。稀釋或濃縮到細(xì)胞保存的最終細(xì)胞濃度的二倍(一般是 400-1000 萬 細(xì)胞 /ml )，加入已經(jīng)配好的等體積的培養(yǎng)液保護劑混合溶液中輕輕混勻，分裝到凍存管，冷凍保存。
(2)  保護劑的使用
細(xì)胞凍存中， 一般使用DMSO 作為保護劑。在細(xì)胞凍存中， DMSO 使用的最終濃度一般是 5-15% ，某種具體細(xì)胞的凍存液中的DMSO濃度可以從ATCC查到。對特別敏感的細(xì)胞特別是雜交瘤細(xì)胞在凍存時使用 95% 血清和 5%DMSO 可能會好些。保護劑在使用時先用培養(yǎng)液或血清配成最終濃度的2倍，再與等體積的懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)液混合。
(3)  細(xì)胞凍存的速率
細(xì)胞的冷凍速率最適控制在讓細(xì)胞有足夠的時間脫水而又不被過度脫水導(dǎo)致細(xì)胞損害。對大多數(shù)細(xì)胞來說，每分鐘降 1 至 3 ℃是合適的。通常的操作是把細(xì)胞先在-20℃1-2個小時，再放入 -80℃冰箱過夜(如果沒有-80℃冰箱，可以用干冰替代)，再轉(zhuǎn)入液氮罐或低于 -130℃的冰箱長期保存。
(4)  儲存環(huán)境
細(xì)胞長期保存溫度是 -130 ℃或更低。液氮罐中氣態(tài)層溫度在 -140℃至 -180℃之間，細(xì)胞可保存在氣態(tài)層或浸入液氮中，如果可能最好保存在氣態(tài)層，因為這樣可避免由于有液氮進入凍存管而在拿出細(xì)胞時引起爆炸(但是這樣液氮罐內(nèi)只能存儲少量液氮，需要經(jīng)常添加)。細(xì)胞也可以在-80℃冰箱保存幾個月左右的時間。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠醌NADH脫氫酶1(NQO1)ELISA試劑盒 ，英文名： NQO1 ELISA Kit

Monkey collagenase I (Collagenase I) ELISA Kit膠原酶I(Collagenase I)ELISA試劑盒

Ratulasensitivethyroid-stimulatinghormone,U-TSHELISAKit 大鼠高靈敏度促甲狀腺激素(U-TSH)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforFT4ELISAKit大鼠游離甲狀腺素規(guī)格：48T/9

小鼠淋巴細(xì)胞趨化因子(Lptn)ELISA試劑盒 ，英文名： Lptn ELISA Kit

人幽門螺旋桿菌IgM(Hp-IgM)ELISA檢測試劑盒HumanHelicobacterpyloriIgM,Hp-IgMELISAKit 96T/48T

大鼠循環(huán)免疫復(fù)合物(CIC)免疫試劑盒 Rat circulating immune complex,CIC ELISA Kit

英文名稱RatmajorhistocompatibilitycomplexELISAKit大鼠組織相容性復(fù)合物(MHC)規(guī)格：96T

人轉(zhuǎn)移因子(TF)ELISA 試劑盒

Human inhibin (INH) ELISA Kit 人抑制素(INH)ELISA試劑盒

Humanai-solubleliveraigen,SLAELISAKit 人抗可溶性肝抗原抗體(SLA)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanhepatitisBvirussurfaceaigen,HBsAgELISA試劑盒人乙型肝炎表面抗原(HBsAg)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

組織谷草酰乙酸轉(zhuǎn)氨酶(GOT)活性光譜法定量檢測試劑盒20次

H

HKb-20人腎上皮細(xì)胞豚鼠心肽(ANP)ELISA試劑盒 ，英文名： ANP ELISA Kit

Human secretory immunoglobulin A (SIgA) ELISA Kit 人分泌型免疫球蛋白A(SIgA)ELISA試劑盒

rabbitbasicfibroblastgrowthfactor,bFGFELISAKit 兔子堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforBCGF(HumanBcellgrowthprotein)ELISAKit人B細(xì)胞生長因

公司所有產(chǎn)品均不得用于人類或動物之臨床診斷或治療，僅可用于工業(yè)或科研等非醫(yī)療目的。