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貨號(hào)	FS-X9606

產(chǎn)品介紹:

Ki-67 蛋白是細(xì)胞周期相關(guān)的一種核蛋白，主要表達(dá)于細(xì)胞增殖分裂的各個(gè)時(shí)期（G1、S、G2 和M 期），但是在靜息的細(xì)胞（G0 期）中不表達(dá)。

Ki-67 常用于檢測腫瘤細(xì)胞的生長指數(shù)（免疫組化法利用計(jì)算細(xì)胞總數(shù)中的Ki-67 陽性細(xì)胞數(shù)所占比例得到Ki-67 指數(shù)）。

中文名稱：Ki67細(xì)胞增殖檢測試劑盒(IHC法)

英文名稱：Ki-67 cell proliferation Detection Kit(IHC)

產(chǎn)品規(guī)格：50T

貨號(hào)：FS-X9606

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

Pim-3原癌基因(PIM3)elisa檢測試劑盒英文名稱：PIM3 ELISA Kit，PIM3，

N-?；拾眂hun酰an水解mei2(ASAH2)elisa檢測試劑盒英文名稱：ASAH2 ELISA Kit，ASAH2，

Neurensin1蛋白(NRSN1)elisa檢測試劑盒英文名稱：NRSN1 ELISA Kit，NRSN1，

Matrin3蛋白(MATR3)elisa檢測試劑盒英文名稱：MATR3 ELISA Kit，MATR3，

分揀連接蛋白13(SNX13)elisa檢測試劑盒英文名稱：SNX13 ELISA Kit，SNX13，

泛核蛋白1(UBN1)elisa檢測試劑盒英文名稱：UBN1 ELISA Kit，UBN1，

防御suβ110(DEFβ110)elisa檢測試劑盒英文名稱：DEFβ110 ELISA Kit，DEFβ110，

耳畸蛋白(OTOF)elisa檢測試劑盒英文名稱：OTOF ELISA Kit，OTOF，

多an調(diào)節(jié)因子1結(jié)合蛋白1(PMFBP1)elisa檢測試劑盒英文名稱：PMFBP1 ELISA Kit，PMFBP1，

抵抗su樣蛋白β(RETNLβ)elisa檢測試劑盒英文名稱：RETNLβ ELISA Kit，RETNLβ，

蛋白激meiBγ(PKBγ)elisa檢測試劑盒英文名稱：PKBγ ELISA Kit，PKBγ，

單核細(xì)胞趨化蛋白2(MCP2)elisa檢測試劑盒英文名稱：MCP2 ELISA Kit，MCP2，

成纖維細(xì)胞生長因子受體2(FGFR2)elisa檢測試劑盒英文名稱：FGFR2 ELISA Kit，F(xiàn)GFR2，

層黏連蛋白α4(LAMα4)elisa檢測試劑盒英文名稱：LAMα4 ELISA Kit，LAMα4，

suan羧化mei(PC)elisa檢測試劑盒英文名稱：PC ELISA Kit，PC，

基質(zhì)重塑關(guān)聯(lián)蛋白8(MXRA8)elisa檢測試劑盒英文名稱：MXRA8 ELISA Kit，MXRA8，

肌球蛋白ⅢA(MYO3A)elisa檢測試劑盒英文名稱：MYO3A ELISA Kit，MYO3A，
Ki67細(xì)胞增殖檢測試劑盒(IHC法)醋suanlv己定標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:500mg 英文名稱：Chlorhexidine Acetate

地美溴an標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:250mg 英文名稱：Demecarium Bromide

組an標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:250mg 英文名稱：Histamine Dihydrochloride

L-胱氨suan標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Cystine

谷氨suan標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Glutamic Acid

谷氨酰an標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:100mg 英文名稱：Glutamine

甘油標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:2ml 英文名稱：Glycerin

美zuo標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Cefmetazole

fu比芬鈉標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Flurbiprofen Sodium

lv霉su標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Chloramphenicol

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