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貨號 | FS-X9696 |
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產品介紹:
AO/PI 雙染細胞凋亡檢測試劑盒是采用DNA探針雙染細胞核的方法檢測細胞的狀態(tài)。橙(Acridine Orange,AO)為一種熒光染料,該染料具有膜通透性,能透過細胞膜,使核DNA和RNA染色。其激發(fā)波長為488nm,吸收波長為515nm。它與細胞中DNA和RNA 結合量存在差別,復合物可發(fā)出不同顏色的熒光,紅色熒光為AO-DNA(F>600nm),綠色熒光為AO-RNA或單鏈DNA(F>530nm)。 在熒光顯微鏡下觀察,橙可透過正常細胞膜,使細胞核呈綠色或黃綠色均勻熒光;而在凋亡細胞中,因染色質固縮或斷裂為大小不等的片斷,形成凋亡小體。橙使其染上致密濃染的黃綠色熒光,或黃綠色碎片顆粒;而壞死細胞黃熒光減弱甚至消失。 Propidium Iodide是一種DNA結合性染料,其激發(fā)和發(fā)射波長分別為488nm和630nm,產生紅色熒光,但無膜通透性,不能透過活細胞膜,只能染死細胞。因此,在熒光顯微鏡下觀察,正常細胞不能著色,早期凋亡細胞呈微弱紅光,晚期凋亡細胞紅光加強,壞死細胞呈強紅色熒光。 儲存條件:染色液2-8℃避光保存。試劑C 2-8℃保存。 |
中文名稱:AO/PI雙染試劑盒
英文名稱:
產品規(guī)格:100T
貨號:FS-X9696
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
Ⅷ(FⅧ)英文名:FⅧ 銜接蛋白β抗體包裝1g
Ⅶ(FⅦ)英文名:FⅦ 銜接蛋白γ/γ-Adaptin抗體包裝250mg
Ⅵ(FⅥ)英文名:FⅥ 通道蛋白-9抗體包裝5g
Ⅴ(FⅤ)英文名:FⅤ 膜粘連蛋白A3抗體包裝1g
Ⅳ(FⅣ)英文名:FⅣ 膜粘連蛋白 A4抗體包裝50mg
Ⅱ(FⅡ)英文名:FⅡ 磷化蛋白激B抗體包裝25g
Ⅰ(FⅠ)英文名:FⅠ 磷化腺苷單磷活化蛋白激α1抗體包裝5g
凝血原片段F1+2(F1+2)英文名:F1+2 磷化蛋白激B抗體包裝1g
凝血受體(TR)英文名:TR 脫氧胞苷脫蛋白抗體包裝250mg
凝血抗凝血復合物(TAT)英文名:TAT 蛋白激錨定蛋白13抗體包裝1g
凝溶膠蛋白(Gelsolin)英文名:Gelsolin AP-1μ2抗體包裝5g
尿微量白蛋白(ALB)英文名:ALB 肥大膜抑制性受體Allergin1抗體包裝5g
核苷磷化1(UPP1)英文名:UPP1 腦鈉通道蛋白1抗體包裝25MG
尿激型纖溶原激活物受體(PLAUR/uPAR)英文名:PLAUR/uPAR 肌動蛋白相關蛋白2/3復合亞單位B1抗體包裝25g
α2巨球蛋白樣蛋白1抗體 α2ML1免疫球蛋白G(IgG)Nintedanib (BIBF 1120) is a potent triple angiokinase inhibitor for VEGFR1/2/3,
AO/PI雙染試劑盒彎孢 中國肉桂皮油半乳糖凝集9
枯草芽孢桿 黑莓提取物胞漿型磷脂A2
大腸埃希氏桿 秘魯浸膏胞外超氧化物歧化
茯苓 杏子提取物飽腹因子
熒光假單胞 蘋果粉吡啶交聯物
美澳型核果褐腐病 甘草提取物(粉)表面活性蛋白A
放線纖維 KN-62表面活性蛋白D
藍色犁頭霉 磷脂酰甘油 PG表皮生長因子
休哈塔假絲酵母 4-(三氟甲基)噠-3,5-二總表皮生長因子受體
連香樹迪茲氏 2--4-氨基-5-甲氧基嘧啶表皮生長因子受體2
巨大芽孢桿 N,N-二甲基對甲苯氨酸氨基轉移
食吡啶紅球 烯酸烯酯二
普通青霉 丁酸橙花酯酮
釀酒酵母 三正丁基膦酮酸激M2型同工
小牛葡萄球 1-(3-羥基-4-甲氧基苯基)-3-甲基-1-丁酮酮酸脫氫激1
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