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貨號	FS-X9678

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：50T|100T

貨號：FS-X9678

產(chǎn)品介紹:

線粒體提取試劑盒用于從動物細胞或組織中分離出完整而純化的線粒體。適合于動物軟組織(肝或腦組織)和硬組織(肌肉)以及培養(yǎng)細胞的線粒體的制備。其制備物產(chǎn)量高，可以被用于細胞凋亡、信號傳遞、代謝和蛋白組學等的研究。

操作步驟：

1. 樣本處理：

a. 組織勻漿：稱取100~200 mg新鮮組織如肝臟、腦、心肌等，PBS或生理鹽水沖洗，洗凈血水，濾紙吸干，用剪刀剪為碎塊放入小容量玻璃勻漿器內(nèi)。加入1.0 mL冰預冷的Lysis Buffer，0℃冰浴上下研磨組織20次;

b. 培養(yǎng)細胞勻漿：消化細胞，PBS洗滌，800g離心5~10 min收集細胞，計數(shù)。每次提取需要5×107個細胞，加入1.0 mL冰預冷的Lysis Buffer重懸細胞，將細胞懸液轉(zhuǎn)移到小容量玻璃勻漿器內(nèi)，0℃冰浴研磨30~40次。

2. 將組織或細胞勻漿物轉(zhuǎn)移到離心管，4℃，1000g 離心5 min。

3. 取上清，轉(zhuǎn)移至新的離心管中，4℃，1000g再次離心5 min。

4. 取上清，轉(zhuǎn)移至新的離心管中，4℃， 12,000 g 離心10 min。離心后的上清含胞漿成分，可從中提取胞漿蛋白。將上清轉(zhuǎn)移到新離心管，線粒體沉淀在管底。

5. 往線粒體沉淀中加入0.5 mL Wash Buffer重懸線粒體沉淀，4℃，1000 g 離心5 min。

6. 取上清，轉(zhuǎn)移至新的離心管中，4℃， 12,000 g 離心10 min。棄上清，高純度的線粒體沉淀在管底。

7. 用50 -100μL Store Buffer 或合適的反應緩沖液重懸線粒體沉淀，立即使用或-70℃保存。

儲存條件：-20℃

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

循環(huán)免疫復合物(CIC)英文名：CIC 錨蛋白重復結構域蛋白20A3抗體包裝500g

血小板因子4(PF-4/CXCL4)英文名：PF-4/CXCL4 錨蛋白重復結構域蛋白22抗體包裝1g

血小板因子3(PF-3)英文名：PF-3 錨蛋白重復結構域蛋白50抗體包裝1g

血小板衍生生長因子可溶性受體α(PDGFsR-α)英文名：PDGFsR-α 氫離子轉(zhuǎn)運ATP合成6G抗體包裝5g

血小板衍生生長因子CC(PDGF-CC)英文名：PDGF-CC 錨蛋白重復結構域蛋白26抗體包裝5ml

血小板衍生生長因子BB(PDGF-BB)英文名：PDGF-BB 錨蛋白重復結構域蛋白26抗體包裝100mg

血小板衍生生長因子AB(PDGF-AB)英文名：PDGF-AB 型肝炎病核結合蛋白-1抗體包裝1g

血小板衍生生長因子AA(PDGF-AA)英文名：PDGF-AA 芳香基硫酯K抗體包裝100MG

血小板生長因子(PDGF)英文名：PDGF 神經(jīng)元突觸前膜蛋白抗體包裝50MG

血小板生成(TPO)英文名：TPO 錨定蛋白G抗體包裝25g

血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa(GP-ⅡbⅢa/CD41+CD61)英文名：GP-ⅡbⅢa/CD41+CD61 肌動蛋白α/α-SMA/α Actin抗體包裝5g

血小板活化因子(PAF)英文名：PAF 整合樣金屬蛋白與凝血1型抗體包裝1g

血小板反應蛋白/凝血敏感蛋白1(TSP-1)英文名：TSP-1 整合樣金屬蛋白與凝血1型-7抗體 (N端抗體)包裝250mg

血纖蛋白原降解產(chǎn)物(FDP)英文名：FDP 整合樣金屬蛋白與凝血1型-7抗體包裝5g

血纖蛋白原γ鏈(FGG)英文名：FGG 內(nèi)收蛋白抗體包裝250mg

磷化芳香N-乙?；D(zhuǎn)移抗體白介2(IL2)XL413 hydrochloride 是一種有效的，選擇性的，ATP 競爭性的 Cdc7 抑制劑，IC50 值為 3.4 nM，同時對 CK2 和 PIM1
線粒體提取試劑盒枝狀枝孢根皮Delta-like ligand 1

中國節(jié)叢孢鄰甲氧基肉桂Delta-like ligand4

麥氏交替單胞 N-Cbz-L-組酸Dickkopf 1

嗜管歐文氏 4-溴-3-甲酸甲酯DLEC1

豬丹絲 2-甲氧基-5-氟尿啶DNA甲基轉(zhuǎn)移1

棒曲霉 4-氟-2-DNA修復基因XRCC1

變平滑假絲酵母二芐基二硫代氨酸鋅D二聚體

黑木耳8808 2,6-二硫酸鹽D-乳酸

空腸彎曲桿 4-乙酰氨-2,2,6,6-四甲基-1-氧D-乳酸鹽

釀酒酵母 4-氨基-2,2,6,6-四甲基氧自由基D-天冬氨酸

高粱生平臍蠕孢 5-溴戊酸乙酯D-天冬氨酸氧化

糞腸球 5-溴-2-氟EB病衣殼抗原IgA

彩色豆馬勃反式-1,2-環(huán)己二Endoglin

黑曲霉叔戊鈉ENOSF1基因

大腸埃希氏 3,5-二氨基-6-吡-2-羧酸甲酯膜外核苷酸焦磷酸；磷酸二酯家族成員2

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