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貨號	FS-X9677

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱：細胞核提取試劑盒

英文名稱：Nuclear Extraction Kit

產品規(guī)格：50T|100T

貨號：FS-X9677

產品介紹:

細胞核提取試劑盒用于從動物細胞或組織中分離出完整而純化的細胞核。適合于動物軟組織(肝或腦組織)和硬組織(肌肉)以及培養(yǎng)細胞的細胞核的制備。其制備物產量高，可以被用于細胞凋亡、信號傳遞、代謝和蛋白組學等的研究。產品不含污染性蛋白酶和核酶，性能穩(wěn)定。

操作步驟：

1. 樣本處理

a. 組織勻漿：稱取100~200 mg新鮮組織如肝臟、腦、心肌等，PBS或生理鹽水沖洗，洗凈血水，濾紙吸干，用剪刀剪為碎塊放入小容量玻璃勻漿器內。加入1.0 mL預冷的Lysis Buffer，再加入50μL Reagent A，0℃冰浴中上下研磨組織20次;有未研磨開的組織，可用雙層紗布過濾。

b. 培養(yǎng)細胞勻漿：消化細胞，PBS洗滌，800 g 離心5~10 min收集細胞，計數(shù)。每次提取需要5 ×107個細胞，加入1.0 mL冰預冷的Lysis Buffer重懸細胞，再加入50μL Reagent A，將細胞懸液轉移到小容量玻璃勻漿器內，0℃冰浴研磨細胞20~30次。

2. 將組織或細胞勻漿物轉移到1.5mL離心管中，4℃，700g 離心5 min。細胞核沉淀在收集管底部，棄上清。加入0.5 mL冰預冷的Lysis Buffer重懸沉淀。

3. 取另一新離心管內加入0.5 mL Medium Buffer，吸取上一步的重懸液，沿管壁小心地加入到此離心管中，置于Medium Buffer之上，4℃，700 g 離心5min。細胞核沉淀在管底。

4. 棄上清，在細胞核沉淀中加入0.5 mL Lysis Buffer重懸細胞核沉淀，1000g 離心10min ，棄上清，得到較純的細胞核沉淀。

5. 用50-100μL Store Buffer 或合適的反應緩沖液重懸細胞核沉淀，立即使用或-70℃保存。

儲存條件：4℃

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

一氧化碳血紅蛋白(HbCO)英文名：HbCO 血管緊張Ⅱ受體相關蛋白抗體包裝5g

一氧化氮合成(NOS)英文名：NOS 膜粘連蛋白2受體抗體包裝1g

一氧化氮(NO)英文名：NO 血管緊張1轉換抑制劑抗體包裝250mg

葉受體(FOLR)英文名：FOLR 拮抗凋亡轉錄因子抗體包裝100g

葉(FA)英文名：FA α-1抗胰糜蛋白抗體包裝25g

鑰孔蟲戚血藍蛋白(KLH)英文名：KLH α-1抗抗體包裝1g

氧化型(GSSG)英文名：GSSG ATP結合蛋白家族6抗體包裝5g

氧化型(GSGS)英文名：GSGS 三磷腺苷結合盒亞家族G1抗體包裝1g

氧化型低密度脂蛋白(OxLDL)英文名：OxLDL 脂聯(lián)受體2抗體包裝5g

氧化高密度脂蛋白(Ox-HDL)英文名：Ox-HDL ANGEL1蛋白抗體包裝100g

氧化低密度脂蛋白抗體(OLAb)英文名：OLAb ANGEL2蛋白抗體包裝25g

氧化低密度脂蛋白(OxLDL)英文名：OxLDL ANKLE2蛋白抗體包裝500g

酰胺腺嘌呤二核苷磷(NADPH)英文名：NADPH 特異性錨樣蛋白1抗體包裝25g

酰胺腺嘌呤二核苷(NADH)英文名：NADH 錨蛋白重復結構域蛋白13B抗體包裝5g

牙本質基質蛋白1(DMP1)英文名：DMP1 錨蛋白重復結構域蛋白20A1抗體包裝25g

芳香烴受體核轉錄蛋白樣2抗體白介2(IL2)Palomid 529 是一種有效的 mTORC1 和 mTORC2 復合體抑制劑。
細胞核提取試劑盒嗜熱脂肪地芽孢桿阿魏酸c-Jun氨基末端激

約氏不動桿預染低分子量蛋白MARKERClara分泌蛋白

黑曲霉曲C-Raf原癌基因絲蘇氨蛋白激

釀酒酵母 D-交酯CREB調節(jié)轉錄輔激活因子1

日內瓦毛霉丹酰尸CREB調節(jié)轉錄輔激活因子2

云南楊黃檳榔堿CX3C趨化因子;fractalkine

麥芽糖假絲酵母酸CXC趨化因子配體16

平菇疊氮環(huán)糊精CXC趨化因子受體1

黃青霉花生四烯酸CXC趨化因子受體2

殺鮭氣單胞虎杖苷CXC趨化因子受體4

變幻青霉 L-鵝肌肽C端聚集蛋白

腐皮殼厚樸酚C-反應蛋白

淺金鏈霉替拉扎明C肽

血紅紅曲霉 Citronella oilDcR3;TNFRSF6B

黑曲霉蒿甲Dectin-1蛋白
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)