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活細(xì)胞染色液(Hoechst 33342)(100×)
細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測試劑盒(WST-1法)
貨號 | FS-X9574 |
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中文名稱:Caspase 8分光光度法檢測試劑盒
英文名稱:Caspase-8 Colorimetric Assay Kit
產(chǎn)品規(guī)格:20T|50T|100T
貨號:FS-X9574
產(chǎn)品介紹:
本試劑盒適用于培養(yǎng)細(xì)胞及新鮮組織caspase-8 檢測。Caspase 家族在介導(dǎo)細(xì)胞凋亡的過程中起著非常重要的作用。在CD95 凋亡途徑中, Caspase-8 作為上游的級聯(lián)酶,可被TNF 激活。受細(xì)胞表面受體(如Fas)的激活,Caspase-8 能引起下游級聯(lián)酶的活性,如Caspase-3。Caspase-8 在正常狀態(tài)下以酶原的形式存在于胞漿中,沒有活性;但在細(xì)胞發(fā)生凋亡階段,它可被激活。Caspase-8 分光光度法檢測試劑盒就是將caspase-8 序列特異性的多肽偶聯(lián)至發(fā)色基團,當(dāng)該底物被caspase-8 剪切后,發(fā)色基團即游離出來,可通過酶標(biāo)儀或分光光度計(λ=405nm 或400nm)測定其吸光值,可考察caspase-8 的活化程度。 注意事項 1. 對某些凋亡誘導(dǎo)劑引起的細(xì)胞凋亡可能存在非依賴于Caspase-8 活化的機制,這種情況時利用本試劑盒檢測Caspase-8 活性無明顯改變,需要考慮凋亡機制中的其他信號通路。 2. Caspase-8 Substrate 避光保存及使用。 3. 細(xì)胞數(shù)量需達(dá)到3~5×106 個或新鮮組織100mg,以便能達(dá)到測定需要的100~200μg 蛋白的要求,因為Caspase-8 的活性與細(xì)胞裂解液的蛋白含量有關(guān),如測定的OD 值偏低,可通過增加細(xì)胞數(shù)量或組織量的方法來提高蛋白量。 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞,細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
G蛋白偶聯(lián)雌激su受體1(GPER)檢測試劑盒 forGProteinCoupledEstrogenReceptor1(GPER)
shi蛋白5(OPN5)檢測試劑盒 forOpsin5(OPN5)
脂蛋白a(Lpa)檢測試劑盒 forLipoprotein,a(Lpa)
神經(jīng)營養(yǎng)因子3(NT3)檢測試劑盒 forNeurotrophin3(NT3)
中腦核仁蛋白(MIDN)檢測試劑盒 forMidnolin(MIDN)
粘蛋白3(MUC3)檢測試劑盒 forMucin3(MUC3)
內(nèi)皮su1(EDN1)檢測試劑盒 forEndothelin1(EDN1)
補體因子P(CFP)檢測試劑盒 forComplementFactorP(CFP)
胞漿磷蛋白3(STMN3)檢測試劑盒 forStathmin3(STMN3)
封閉蛋白5(CLDN5)檢測試劑盒 forClaudin5(CLDN5)
神經(jīng)介suS(NMS)檢測試劑盒 forNeuromedinS(NMS)
肌球蛋白輕鏈1(MYL1)檢測試劑盒 forMyosinLightChain1,Alkali,FastSkeletal(MYL1)
D-二聚體(D2D)檢測試劑盒 forD-Dimer(D2D)
小泛su相關(guān)修飾蛋白2(SUMO2)檢測試劑盒 forSmallUbiquitinRelatedModifierProtein2(SUMO2)
補體成分3(C3)檢測試劑盒 forComplementComponent3(C3)
過氧化氫mei(CAT)檢測試劑盒 forCatalase(CAT)
肝型脂肪suan結(jié)合蛋白(FABP1)檢測試劑盒 forFattyAcidBindingProtein1,Liver(FABP1)
Caspase 8分光光度法檢測試劑盒標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:200mg 英文名稱:Modafinil CIV
丙二chun二辛suan酯/二癸suan酯標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:1ml 英文名稱:
噻lv匹定相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:20mg 英文名稱:Ticlopidine Related Compound A
噻lv匹定相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:20mg 英文名稱:Ticlopidine Related Compound B
相關(guān)物質(zhì)C標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:20mg 英文名稱:Modafinil Related Compound C
大豆粉標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:2.5g 英文名稱:Defatted Powdered Soy
tong芬相關(guān)物質(zhì)C標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:20mg 英文名稱:
聚葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:200mg 英文名稱:Polydextrose
環(huán)絲氨suan標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:250mg 英文名稱:Cycloserine
zuo肟標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:350mg 英文名稱:Ceftizoxime
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