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當(dāng)前位置：上海撫生實業(yè)有限公司>>細胞生物學(xué)試劑>>細胞組織染色>> 人淋巴細胞分離液
| 貨號 | FS-X9746 |
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中文名稱：人淋巴細胞分離液
英文名稱：
產(chǎn)品規(guī)格：200ml
貨號：FS-X9746
產(chǎn)品介紹:
人淋巴細胞分離液采用優(yōu)質(zhì)原料科學(xué)配方配制而成。適用于從血液及組織勻漿中分離所需細胞。本品為無菌溶液。 儲存條件：室溫(18-25℃)避光保存。 開封后 2-8℃保存。 有效期：兩年。 使用方法： 由于各離心機的性能差異以及實驗室的溫度不同，佳分離條件(離心轉(zhuǎn)速、離心時間等)請根據(jù)實際摸索。 1．取新鮮抗凝血 1ml，與1ml Hank’s液混勻。 2．將以上液體小心加于 1ml的細胞分離液的液面上。 3．以 1500RPM離心15分鐘。 4．此時離心管中由上至下細胞分四層。第一層：血漿或組織勻漿液層。第二層：環(huán)狀乳白色淋巴細胞層。第三層：透明分離液層。第四層：紅細胞層 ● 此紅細胞層，表面有懸起的部分白細胞層。收集界面上的細胞，放入含 4-5毫升Hank’s 液的試管中，充分混勻后，以1500-2000RPM離心10分鐘。收集第二層細胞(淋巴細胞)沉淀經(jīng)2次洗滌收集細胞。 |
培養(yǎng)操作步驟：
1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學(xué)檢測。
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)： 1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??； 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置； 3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化； 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)； 5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)； | 二、免疫熒光鑒定： 1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min； 2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min； 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜； 5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h； 6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結(jié)果分析
a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
白細胞介16(IL-16)英文名：IL-16 B淋巴成熟因子抗體包裝5g
白細胞介13(IL-13)英文名：IL-13 促凋亡Bik蛋白抗體包裝1g
白細胞介12(IL-12/P70)英文名：IL-12/P70 癌抑癌蛋白抗體包裝25g
白細胞介12(IL-12/P40)英文名：IL-12/P40 癌易感基因環(huán)狀結(jié)構(gòu)域蛋白抗體包裝5g
白細胞介10(IL-10)英文名：IL-10 癌相關(guān)抗原BRCAA1抗體包裝25g
白細胞分化抗原配體40(CD40/TNFRSF5)英文名：CD40/TNFRSF5 腦組織表達X連鎖蛋白1抗體包裝5g
白細胞分化抗原30配體(CD30L)英文名：CD30L B淋巴連接蛋白抗體包裝25g
白介21(IL-21)英文名：IL-21 磷化T淋巴連接蛋白抗體包裝5g
白介1受體拮抗劑(IL-1RA)英文名：IL-1RA Bcr抗體包裝1g
白介1β(IL-1B)英文名：IL-1B 磷化癌易感基因1抗體包裝5g
白介17(IL-17)英文名：IL-17 磷化Bcl-2抗體包裝5mg
白介12(IL-12/P70)英文名：IL-12/P70 磷化Bcl-2抗體包裝25g
白介12(IL-12/P40)英文名：IL-12/P40 磷化T淋巴受體抗體包裝5g
L選擇(SELL)英文名：SELL 骨架銜接蛋白BIN3抗體包裝1g
E-鈣粘附分子(E-Cadherin/CDH1/CD324)英文名：E-Cadherin/CDH1/CD324 雙向染色體分裂蛋白1抗體包裝250mg
性磷樣蛋白2抗體干擾α17(IFNα17)LDN193189 是一種選擇性的 BMP I 型受體抑制劑，抑制 ALK2 和 ALK3 的 IC50 分別為 5 nM 和 30 nM。對 ALK4，ALK
人淋巴細胞分離液釀酒酵母 單叔丁基琥珀酯皮質(zhì)
桔橙鏈霉 5-硝基噻酚-2-甲皮質(zhì)結(jié)合球蛋白
聚生殼 Fomc-2-氨基皮質(zhì)酮;腎上腺酮
Maribius pelagius 2-(3-基)-1,3-二噁戊環(huán)皮質(zhì)抑
費氏桿費氏亞種 2-(1-環(huán)己烯基)環(huán)己酮脾臟酪激
小孢毛霉 4,8-二辛氧基-苯并[1,2-b:3,4-b]二噻吩-2,6-二嘌呤能受體P2X7
黃微綠鏈霉 4-氟-3-硝基溴芐破骨分化因子
黑曲霉 5-溴-1-甲基-1,2,4-三氮唑破傷風(fēng)抗體
谷棒桿Ⅰ型 1-十六烷磺鈉脯4羥化a1
貝倫格葡萄座腔 1-N-BOC-4-(4-磺酰氧甲基)脯羥化
枯草芽孢桿 2,3-二甲甲酯脯肽
大腸埃希 美他沙酮葡萄球蛋白A
米根霉 4-苯甲?；∑咸烟?6-磷
鮑魚菇 O-芐基-L-酪葡萄糖-6-磷脫氫
畢赤酵母 4-苯甲?；〖柞テ咸烟羌?/span>
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