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當前位置：上海撫生實業(yè)有限公司>>細胞生物學試劑>>細胞凋亡與增殖>> MTT細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒
| 貨號 | FS-X9707 |
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產品介紹:
MTT法細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒被廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的檢測。活細胞的線粒體中存在與NADP相關的脫氫酶，可將黃色的MTT還原生成結晶狀的藍紫色的Formazan，死細胞無此酶，MTT不被還原。在特定溶劑存在的情況下，Formazan可以被*溶解。然后通過酶標儀可以測定460-630nm波長附近的吸光度。細胞增殖越多越快，則吸光度越高；細胞毒性越大，則吸光度越低。 本試劑盒靈敏度高，線性范圍寬，使用方便。 儲存條件：-20℃避光保存。 有效期：一年。 |
中文名稱：MTT細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒
英文名稱：
產品規(guī)格：250T|500T
貨號：FS-X9707
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)： 1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小； 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置； 3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化； 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)； 5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)； | 二、免疫熒光鑒定： 1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min； 2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min； 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜； 5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h； 6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結果分析
a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟：
1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
降鈣原(PCT)英文名：PCT 淀粉樣蛋白β前體樣蛋白2抗體包裝250mg
降鈣基因相關肽(CGRP)英文名：CGRP 淀粉樣蛋白β前體樣蛋白1抗體包裝1g
降鈣(CT)英文名：CT 轉錄激活蛋白crsp70抗體包裝25g
堿性磷(ALP)英文名：ALP 卵巢、胎盤、前列腺、蛋白22抗體包裝5g
堿性成纖維細胞生長因子(bFGF/FGF2)英文名：bFGF/FGF2 錨蛋白重復結構域蛋白33B抗體包裝1g
堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)英文名：bFGF 載脂蛋白C3抗體包裝5g
狀腺抗體(TAb)英文名：TAb 凋亡增強核抗體包裝1g
狀腺(T4)英文名：T4 染色體脆弱性相關基因抗體包裝1g
狀腺球蛋白(TG)英文名：TG 磷化蛋白激B抗體包裝25g
狀腺過氧化物(TPO)英文名：TPO 銅轉運蛋白質β鏈抗體包裝5g
狀旁腺激相關蛋白(PTHrP)英文名：PTHrP ?；铣杉易?抗體包裝1g
狀旁腺激(PTH)英文名：PTH 性磷樣蛋白2抗體包裝25g
種胎兒球蛋白/胎蛋白(AFP)英文名：AFP AHNAK核蛋白2抗體包裝5g
基化(Methylase)英文名：Methylase 二磷腺苷核糖基化因子6相互作用蛋白抗體包裝1g
己糖激(HK)英文名：HK p53誘導蛋白5抗體包裝250mg
磷化APP淀粉樣肽前體蛋白抗體催乳(PRL)Amlodipine磺鹽是長效鈣離子通道抑制劑。
MTT細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒芽孢桿 4-嗎啉苯酸芳香烴受體
大腸桿 三山崳精非受體型蛋白酪酸激
卡爾斯巴德唯鹽 3,4,5-氧基苯非酰基化Ghrelin
單孢共頭霉 4-Thioanisolemagnesium Bromide肥大類胰蛋白
奇異球 4-羥基-2-肥大羧肽
黑曲霉 4-硝基芐鹽酸鹽肥胖抑制
紅菇屬 2,3,-二-5-氟吡啶肥
泡盛曲霉 2-氨基-4-甲酸甲酯肺癌抗原
多主葡萄殼 6-甲基-3-氨基噠肺表面活性物質相關蛋白A
梭 9-(3-溴苯基)-9H-咔唑肺表面活性物質相關蛋白A2
楊生盾殼霉 2--3-溴-6-肺表面活性物質相關蛋白B
枯草芽胞桿 2-羥基-4-甲肺表面活性物質相關蛋白C
嗜熱脂肪地球芽胞桿 1-丁基-3-甲基咪唑化鋁鹽肺表面活性物質相關蛋白D
枯草芽胞桿 4--6-甲基喹啉肺部活化調節(jié)趨化因子
白靈側耳 (S)-1-[(乙?；被?甲基]-2-乙基乙酸酯肺部活化調節(jié)趨化因子
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