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貨號(hào)	FS-X9646

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱：DAPI雙鏈DNA染料

英文名稱：DAPI dihydrochloride

產(chǎn)品規(guī)格：10mg

貨號(hào)：FS-X9646

產(chǎn)品介紹:

DAPI，也稱DAPI dihydrochloride，是一種可以穿透細(xì)胞膜的藍(lán)色熒光染料，和雙鏈DNA結(jié)合后可以產(chǎn)生比DAPI自身強(qiáng)20多倍的熒光。和EB(ethidium bromide)相比，對(duì)雙鏈DNA的染色靈敏度要高很多倍。因?yàn)镈API是含有特定AT序列DNA的一種嵌入劑，它能像Hoechst染料一樣粘附在DNA雙螺旋的小溝區(qū)。盡管DAPI不能通過(guò)活細(xì)胞膜，但卻能穿透擾亂的細(xì)胞膜而對(duì)核染色。DAPI具有很高的光漂白承受水平，能用來(lái)檢測(cè)酵母線粒體DNA，葉綠體DNA，病毒DNA，microplasm DNA以及染色體DNA。DAPI-DNA復(fù)合物的激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)分別為360nm和460nm。

DAPI染色常用于細(xì)胞凋亡檢測(cè)，染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細(xì)胞儀檢測(cè)。DAPI也常用于普通的細(xì)胞核染色以及某些特定情況下的雙鏈DNA染色。推薦工作濃度為0.5-10μg/ml。

：28718-90-3

分子式：C16H17Cl2N5

分子量：350.25

純度：>90% (from N)

注意事項(xiàng)

1)DAPI對(duì)人體有一定刺激性，請(qǐng)注意適當(dāng)防護(hù)。

2)熒光染料都存在淬滅的問(wèn)題，建議染色后盡量當(dāng)天完成檢測(cè)。

3)為減緩熒光淬滅可以使用抗熒光淬滅封片液。

4)為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細(xì)胞周期suJ(CCNJ)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：CCNJ ELISA Kit，CCNJ，

GTPmei活化蛋白(GAP)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：GAP ELISA Kit，GAP，

B細(xì)胞淋巴瘤-XL(Bcl-xl)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：Bcl-xl ELISA Kit，Bcl-xl，

CD82分子(CD82)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：CD82 ELISA Kit，CD82，

Ⅱ型膠原C端肽(CTX-Ⅱ)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：CTX-Ⅱ ELISA Kit，CTX-Ⅱ，

26S蛋白mei體(26S PSM)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：26S PSM ELISA Kit，26S PSM，

胰島su樣生長(zhǎng)因子1受體(IGF-R1)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：IGF-R1 ELISA Kit，IGF-R1，

二肽基肽mei4(DPP4)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：DPP4 ELISA Kit，DPP4，

白介su1受體拮抗劑(IL-1RA)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：IL-1RA ELISA Kit，IL-1RA，

組蛋白脫乙酰基mei1(HDAC1)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：HDAC1 ELISA Kit，HDAC1，

轉(zhuǎn)化因子2β(TRA2β)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：TRA2β ELISA Kit，TRA2β，

腫瘤壞死因子配體超家族成員9(TNFSF9)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：TNFSF9 ELISA Kit，TNFSF9，

反三碘jia狀腺原氨suan(rT3)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：rT3 ELISA Kit，rT3，

蛋白磷suanmei1調(diào)控/抑制因子亞基1A(PPP1R1A)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：PPP1R1A ELISA Kit，PPP1R1A，

疊氮胸(AZT)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：AZT ELISA Kit，AZT，

單核細(xì)胞趨化蛋白2(MCP-2)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：MCP-2 ELISA Kit，MCP-2，

雌激su硫suan轉(zhuǎn)移mei(SULT1E1)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：SULT1E1 ELISA Kit，SULT1E1，
DAPI雙鏈DNA染料碘海chun相關(guān)化合物A標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:100mg 英文名稱：

jia泛葡an標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:500mg 英文名稱：Metrizamide

鹽suanfu庚suan酯標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:125mg 英文名稱：

別嘌chun相關(guān)物質(zhì)E標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:25mg 英文名稱：

lvfu舒松標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Halcinonide

相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:100mg 英文名稱：

阿糖尿標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:50mg 英文名稱：Uracil Arabinoside

jia氧芐啶相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:25mg 英文名稱：

氫溴suan羥標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：

巴吉林鹽suan鹽標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Pargyline Hydrochloride
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)