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上海撫生實(shí)業(yè)有限公司
初級(jí)會(huì)員 | 第8年

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鈣鹽染色液(改良茜素紅S法)

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所  在  地上海市

更新時(shí)間:2022-05-16 16:50:21瀏覽次數(shù):202次

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貨號(hào) FS-X10216
鈣鹽染色液(改良茜素紅S法)正在熱銷的產(chǎn)品:HDAC5/FITC 熒光標(biāo)記組蛋白去?;?抗體IgG二異丁酮 異構(gòu)體混合物,97%
HDAC6/FITC 熒光標(biāo)記組蛋白去?;?抗體IgG2,4-二-3-戊酮 98%
phospho-HDAC6 (Ser22) /FITC 熒光標(biāo)記化組蛋白去?;?抗體IgG2-庚 98%
HDAC7/FITC 熒光標(biāo)記組蛋白去酰化7抗體IgG3-庚酮 98%

培養(yǎng)操作步驟:

1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);

4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;

5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱:鈣鹽染色液(改良茜素紅S法)

英文名稱:

產(chǎn)品規(guī)格:3×50ml

貨號(hào):FS-X10216

產(chǎn)品介紹:

用途:

用于顯示未經(jīng)脫鈣處理的冰凍、石蠟包埋組織及培養(yǎng)的細(xì)胞中的鈣鹽染色。

注意事項(xiàng):

又稱McGee-Russell茜素紅法,鈣沉積物成橙紅色,染色時(shí)間取決于鈣的含量,檢測(cè)少量鈣時(shí)更有效。復(fù)染液為mayer蘇木素。

儲(chǔ)存條件:4℃,避光,12個(gè)月

實(shí)驗(yàn)報(bào)告:

一、分離與培養(yǎng):

1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;

2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;

5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

土地叢毛單胞菌G蛋白偶合受體激1抗體Human TBCB 大鼠角化生長(zhǎng)因子(KGF)免疫試劑盒

粉狀畢赤酵母促胃泌釋放肽抗體Human TBX21/T-bet 大鼠角化內(nèi)分泌因子(KAF)/雙調(diào)蛋白(AR)免疫試劑盒

麥根腐平臍蠕孢磷化G蛋白通路抑制蛋白1抗體Human TDGF1(TeRatocarcinoma-derived growth factor 1) 大鼠膠質(zhì)系來(lái)源的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(GDNF)免疫試劑盒

解烴棒桿菌腦糖原磷化抗體Human NPR2(Atrial natriuretic peptide receptor 2) 大鼠膠原吡啶交聯(lián)(PYD)免疫試劑盒

Fusarium venenatum NirenbergG基丁受體3抗體Human TAP1 大鼠膠原C末端肽(CTX)免疫試劑盒

短小芽孢桿菌G基丁受體α3抗體Human TBCC 大鼠降鈣原(PCT)免疫試劑盒

草木樨中華根瘤菌GEN1蛋白抗體Human MTTP(Microsomal triglyceride transfer protein large subunit) 大鼠降鈣基因相關(guān)肽(CGRP)免疫試劑盒

光滑青霉谷酰磷核糖基焦磷?;D(zhuǎn)移Human TBCD 大鼠降鈣(CT)免疫試劑盒

蜂房哈夫尼菌α-半乳糖抗體Human TBCA 大鼠堿性磷(ALP)免疫試劑盒

豌豆根瘤菌蛋白偶聯(lián)受體55抗體Human TARS2 大鼠堿性成纖維生長(zhǎng)因子6(bFGF-6)免疫試劑盒

香菇生長(zhǎng)抑制DNA損傷基因45γ抗體 GADD45γHuman TARSL2 大鼠堿性成纖維生長(zhǎng)因子4(bFGF-4)免疫試劑盒

孟氏假單胞菌生長(zhǎng)停滯特異性蛋白2家族3抗體Human TAF1L 大鼠堿性成纖維生長(zhǎng)因子(bFGF)免疫試劑盒

麥根腐平臍蠕孢顆粒K抗體Human TAF1 大鼠甲狀腺抗體(TAb)免疫試劑盒

灰葡萄孢菌*甘油磷二酯磷結(jié)構(gòu)域5抗體Human TAF3 大鼠甲狀腺(T4)免疫試劑盒

球孢白僵菌γ谷酰轉(zhuǎn)移抗體Human TAF6L 大鼠甲狀腺球蛋白IgG抗體免疫試劑盒

克魯斯假絲酵母G1基丁A型受體α1抗體Human TAF5L 大鼠甲狀腺球蛋白(TG)免疫試劑盒

構(gòu)巢裸孢殼Emericella│nidulans 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.0%(GC)鹽益母草堿

地芽孢桿菌Geobacillus│sp. 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.5%(GC)去異波爾定

被孢霉屬Mortierella│sp. 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品土荊皮乙
鈣鹽染色液(改良茜素紅S法)谷棒桿 5-溴-2-三氟甲苯干擾

層迭靈芝 2,4,6-三氟苯轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子

微金放線 媒介紅p62

*鎖擲孢酵母 6-氨基煙甲酯微管相關(guān)蛋白輕鏈3II

木拉克酵母 5-吡-2-羧血清淀粉樣蛋白A2

粘孢白僵 4-苯氧基乙白介25

枯草芽孢桿 Nα-(叔丁氧羰基)-τ-對(duì)甲苯磺酰基-L-組單類神經(jīng)遞質(zhì)

屎腸球 N-芐氧羰基-DL-亮5′2 羥色

芽孢桿屬 N(α)-Z-L-2,3-二氨基I型膠原蛋白

腫大地桿 2-氨基-3,5-二溴吡啶精氨基琥珀合成

地霉雙足囊 5-氨基-2,4,6-三間苯二甲血清淀粉樣蛋白A1

棒狀乳桿棒狀亞種 1-(2-甲氧苯基)哌Flt3配體

細(xì)鏈格孢 N-乙酰-L-谷氨酰脂肪型脂肪結(jié)合蛋白4

氣生鞘氨單胞 胍乙糖原合成激

三葉草根瘤 季戊四三烯酯, 300-400ppm 4-甲氧基做穩(wěn)定劑蛋白磷脂
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

 


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