實時熒光定量PCR：
實時熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限，實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據(jù)標準曲線獲得定量結(jié)果。因此，實時熒光定量PCR無需內(nèi)標是建立在兩個基礎(chǔ)之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時，剛剛進入真正的指數(shù)擴增期（對數(shù)期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內(nèi)擴增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系，可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內(nèi)標法是一種準確的、值得信賴的科學(xué)方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確，重現(xiàn)性*定量方法，已得到的*，廣泛用于基因表達研究、轉(zhuǎn)基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領(lǐng)域。
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參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：病毒性神經(jīng)壞死癥(VNN))核酸定性檢測試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品貨號：FS-P10678
產(chǎn)品分類：RT-PCR法
產(chǎn)品運輸：低溫運輸
儲存條件：-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
運輸：低溫、避光，快遞免費送貨上門。
產(chǎn)品特點：
本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計引物而開發(fā)的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟 
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）    1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
定量PCR方法：
a、競爭法
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內(nèi)切位點的外源競爭性模板。在同一反應(yīng)管中，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增（其中一個引物為熒光標記）。擴增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物，競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段，而待測模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開，分別測定熒光強度，根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
b、內(nèi)參照法
在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標和引物，內(nèi)標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記，下游引物不標記。在模板擴增的同時，內(nèi)標也被擴增。在PCR產(chǎn)物中，由于內(nèi)標與靶模板的長度不同，二者的擴增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來，分別測定其熒光強度，以內(nèi)標為對照定量待檢測模板。
c、PCR－ELISA法
利用di高辛或生物素等標記引物，擴增產(chǎn)物被固相板上特異的探針所結(jié)合，再加入抗di高辛或生物素酶標抗體－辣根過氧化物酶結(jié)合物，最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實驗，若加入內(nèi)標，作出標準曲線，也可實現(xiàn)定量檢測目的。
PCR的反應(yīng)條件：
因擴增片段的大小、反應(yīng)體積、使用擴增儀器的不同而不同。
◇ 循環(huán)次數(shù)
根據(jù)模板DNA的量以及擴增片段的大小，設(shè)定25～30個循環(huán)。
如果循環(huán)次數(shù)太少，擴增量不足；如果循環(huán)次數(shù)太多，則會出現(xiàn)Smear。
◇ Anneal以及Extension
合適的Anneal溫度通常在45～68℃之間 (預(yù)備實驗可2℃間隔進行)。另外，由于在60～68℃間，也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內(nèi)設(shè)定Anneal-Extension溫度, 進行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時，每kbp大體可設(shè)定30秒～1分鐘；當溫度設(shè)定在68℃以下時, 時間設(shè)定可稍長一些。通常，Anneal溫度太高，有時會得不到擴增產(chǎn)物；Anneal溫度太低時，容易發(fā)生非特異性反應(yīng)。另外，Extension時間太短時，會得不到擴增產(chǎn)物或者會有一些短的非特異性產(chǎn)物優(yōu)成；而Extension時間太長時，會出現(xiàn)Smear。
銅綠假單胞菌生長條件: 28℃培養(yǎng)基: CM0002提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no 真空冷凍干燥法

 HBUM171040模式菌株: no安全等級: 1種屬: Streptomyces│sp.土壤提供形式: 凍干物培養(yǎng)基: 0149生長條件: 28℃

香菇培養(yǎng)基: 0017食用菌, 香菇多糖提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 25℃ 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

小角狀節(jié)皮菌培養(yǎng)基: 0014模式菌株: no土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 25-28℃ -80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法；定期移植法

德氏乳桿菌培養(yǎng)基: CM0006模式菌株: no健康孕婦分泌物提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 37℃ -80℃冰箱凍結(jié)法

 AS1.219培養(yǎng)基: 598模式菌株: no種屬: Pseudomonas│geniculata提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 25℃ 真空冷凍干燥法

 -1047℃冰箱凍結(jié)；真空冷凍干燥

芥黃蜜環(huán)菌培養(yǎng)基: 72模式菌株: no子實體提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1生長條件: 24 定期移植法

酵母菌培養(yǎng)基: 0013啤酒酵母提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 25-28℃ 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

 ivcas7.00420對小菜蛾有較高性。模式菌株: no種屬: Bacillus│thuringiensis提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: 0002生長條件: 30℃

釀酒酵母培養(yǎng)基: CM0013黃酒。提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 25-28℃ 真空冷凍干燥法

AS2.449飼料模式菌株: no種屬: Rhodosporidium toruloides提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: YM 培養(yǎng)基：酵母提取物，3.0 g 麥芽提取物，3.0 g 葡萄糖，10.0 g 蛋白棟，5.0 g 瓊脂，20.0 g 蒸餾水1000 ml ，pH 6.2 +/- 0.2，121℃，15min。生長條件: 28-30℃,好氧,2-3天

大腸埃希氏菌生長條件: 37℃培養(yǎng)基: 33提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no 真空冷凍干燥法

 -1048℃冰箱凍結(jié)；真空冷凍干燥

米曲霉培養(yǎng)基: CM0077釀造醬油。提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 30℃ 真空冷凍干燥法

中國臺灣根霉培養(yǎng)基: CM0017釀造白酒。提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 28-30℃ 真空冷凍干燥法

2--3-基

甲基糠基二硫

4-基-3-溴

乙乙酯

Ethyl (triphenylphosphoranylidene)acetate  乙氧甲?；鶃喖谆? 1099-45-2

Artesunate  青蒿琥酯  88495-63-0

大鼠腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體4(AIL-R4)ELISA試劑盒 ，英文名： AIL-R4 ELISA Kit

人皰疹抗體(HG)ELISA檢測試劑盒HumanHerpesGestation,HGELISAKit 96T/48T

大鼠叉頭框蛋白P3(FoxP3)免疫試劑盒 Rat Forkhead Box P3,FOXP3 ELISA Kit

CLIAKitfoNF-Beta(MouseTumornecrosisfactorBeta)ELISAKIT小鼠腫瘤壞死因子β規(guī)格：48T/96T

全組織過氧化酶活性染色試劑盒10次

ELISAKitGM1人抗神經(jīng)節(jié)苷脂抗體規(guī)格：48T/96T
病毒性神經(jīng)壞死癥(VNN))核酸定性檢測試劑盒伽升沃D107390-08-9中文別名：1,3,6-三羥基-8-(3-羥基-3-甲基丁基)-7-甲氧基-2-(3-甲基-2-丁烯-1-基)-口山  

英文名：Garcinone D  

英文別名：1,3,6-Trihydroxy-8-(3-hydroxy-3-methylbutyl)-7-methoxy-2-(3-methyl-2-buten-1-yl)-9H-xanthen-9-one  

登錄號：107390-08-9

分子式：C24H28 O7

分子量：428.47

分子結(jié)構(gòu)：

規(guī)格：20 mg/支

純度：≥ 98%

用途：用于含量測定/鑒定/藥理實驗等。

提取來源：藤黃科莽吉柿(Garcinia mangostana)

溶解性：可溶于DMSO、熱，不溶于等溶劑。

熔點：202-204 ºC

藥理藥效：具有一定的抗氧化、消炎等活性。

貯存條件： 4℃冷藏、密封、避光

有效期： 2年