測定原理:
PAO催化多胺氧化產生過氧化氫,在過氧化物酶存在的條件下與底物顯色,在550nm下有特征吸收峰,通過測定吸光值增加速率來反映PAO活性。
PAO活性計算:
1、按樣本蛋白濃度計算:
單位定義:每mg組織蛋白在每mL反應體系中每分鐘A550變化0.001為一個酶活力單位。
PAO(U/mg prot)=ΔA×V反總÷(V樣×Cpr)÷0.001÷T =333.33×ΔA÷Cpr
2、按樣本鮮重計算:
單位定義:每g組織在每mL反應體系中每分鐘A550變化0.001為一個酶活力單位。
PAO(U/g 鮮重)=ΔA×V反總÷(W× V樣÷V樣總)÷0.001÷T =333.33×ΔA÷W
3、按細菌或細胞密度計算:
單位定義:每1萬個細菌或細胞在每mL反應體系中每分鐘A550變化0.001為一個酶活力單位。
PAO(U/104 cell)=ΔA×V反總÷(500×V樣÷V樣總)÷0.001÷T =0.667×ΔA
按液體體積計算
單位的定義:每mL液體樣本在每mL反應體系中每分鐘A550變化0.001為一個酶活力單位。
PAO(U/mL)=ΔA×V反總÷V樣÷0.001÷T =333.33×ΔA
V反總:反應體系總體積,0.2mL;V樣:加入樣本體積,0.02 mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應時間,30 min;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g;500:細菌或細胞總數,500萬。
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