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介紹
有機(jī)堿三聚氰胺用于制造許多產(chǎn)品，包括塑料、阻燃劑、顏料和化肥。最近在動物飼料和人類食用食品中添加三聚氰胺以增加蛋白質(zhì)含量的做法已被報道。由于三聚氰胺污染可導(dǎo)致動物和人的嚴(yán)重疾病或死亡，人們對確定檢測各種食品中三聚氰胺污染的方法越來越感興趣。

在此應(yīng)用說明中，我們介紹和驗(yàn)證了 Beacon AnalyticalSystems 公司的三聚氰胺孔板試劑盒。Beacon 三聚氰胺孔板試劑盒是一種競爭性的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) (ELISA)，用于對污染樣品中的三聚氰胺進(jìn)行定量分析。使用該試劑盒可檢測多種樣品類型，包括乳制品、麥麩和干濕寵物食品。三聚氰胺是通過與提取液混合或震蕩從樣品中提取出來的。然后將三聚氰胺 HRP 共軛物，樣品提取物和校準(zhǔn)物吸移到包被了三聚氰胺抗體的測試孔中。 孵育 30 分鐘后，將孔洗滌以除去未結(jié)合的三聚氰胺，然后將底物添加到孔中。30 分鐘后停止反應(yīng)，并使用帶有光吸收功能的酶標(biāo)儀測量孔的吸光度。測試樣品的三聚氰胺濃度由三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得到。
來自 Molecular Devices 的光吸收酶標(biāo)儀用于檢測三聚氰胺測定實(shí)驗(yàn)中的吸光度。Molecular Devices 的AquaMax4000 微孔板清洗機(jī)同時吸出并分配所有微孔板孔，以快速完成所需的清洗步驟。數(shù)據(jù)收集和分析使用 SoftMaxPro GxP 軟件中的三聚氰胺 ELISA 預(yù)先設(shè)置的模板，SoftMaxPro GxP 軟件是符合 FDA 21 CFR Part 11 的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)分析軟件。

材料
具有光吸收檢測模式的 Molecular Devices酶標(biāo)儀：
• SpectraMax Plus 384 (cat. #PLUS 384)
• SpectraMax 190 (cat. #190)
• SpectraMax 340PC384 (cat. #340PC 384)
• VersaMax™ (cat. #VERSAMAX)
• SpectraMax M2/M2e (cat. # M2 or M2E)
• SpectraMax M5/M5e (cat. #M5 or M5E)
• FlexStation 3 (cat. #FLEX3)
• SpectraMax i3x (cat. #i3x)
• SpectraMax iD3 (cat. #iD3)
Molecular Devices AquaMax 4000 微孔板清洗機(jī)( 按需配置 )三聚氰胺孔板試劑盒 (Beacon AnalyticalSystems, cat. #20-0158)

優(yōu)勢
• 三聚氰胺污染檢測的質(zhì)量保證篩選方案
• 降低人工操作的處理方式提高其通量
• 使用 SoftMax Pro GxP 軟件進(jìn)行完整的數(shù)據(jù)分析
方法
采用以下測試步驟 (1)：
• 在進(jìn)行測試之前，讓試劑達(dá)到室溫。
• 將適當(dāng)數(shù)量的包被有三聚氰胺抗體的測試孔放在微孔支架中。 將剩余的測試孔重新密封在提供的拉鏈袋中。 將另外的非抗體包被的孔置于微孔架中，以使所有 96 個位置均被占據(jù)。這樣就可以使用 AquaMax4000 微孔板清洗機(jī)，該清洗機(jī)可以一次清洗所有 96 孔。
• 使用帶有一次性吸頭的移液器將 150 µL校準(zhǔn)品 ( 一式三份 ) 或稀釋的樣品提取物添加到適當(dāng)?shù)臏y試孔中。每個都使用干凈的移液器吸頭。
• 向每個孔中添加 50 µL 三聚氰胺 HRP 共軛物。
• 將板輕輕震蕩 60 秒，然后在室溫下孵育30 分鐘。
• 抽吸孔中的內(nèi)容物，并使用 AquaMax4000 微孔板清洗機(jī)分配 250 µL 洗滌溶液(1x PBS / 0.05％Tween-20)，總共進(jìn)行四個抽吸/分配循環(huán)。
• 最后一次洗滌后，將倒置的平板輕拍到吸水紙上以去除殘留的洗滌液。
• 將 100 µL 底物分配到每個測試孔中，并將板在室溫下孵育 30 分鐘。
• 將 100 µL 終止溶液分配到每個測試孔中。
• 使用 SoftMax Pro 軟件中預(yù)先設(shè)置的模板，在 VersaMax 酶標(biāo)上于 450 nm 讀取測試孔的吸光度。
• 使用 SoftMax Pro 軟件繪制校準(zhǔn)物曲線。
結(jié)果
光密度 (OD) 值用于構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線。 將校準(zhǔn)物繪制為校準(zhǔn)物的 OD 值 ( y 軸 ) 與校準(zhǔn)物濃度的對數(shù) ( x 軸 ) 的關(guān)系。 然后可以通過插入標(biāo)準(zhǔn)曲線公式計(jì)算樣品三聚氰胺含量。OD 值大于zuidi校準(zhǔn)物或小于最高校準(zhǔn)物的樣品必須分別報告為 < 20 ppb 或 >500 ppb。

圖 1 顯示了如上所述繪制的三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)曲線，并帶有 4 參數(shù)曲線擬合。 圖 2 顯示了使用半對數(shù)曲線擬合繪制的三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品。通常，4 參數(shù)曲線在標(biāo)準(zhǔn)曲線的gaoduan和低端具有更好的擬合度，因此是可取的。
表 1 總結(jié)了三聚氰胺孔板試劑盒校準(zhǔn)物的數(shù)據(jù)。使用產(chǎn)品插頁中概述的測試步驟以及用于所需洗滌步驟的AquaMax4000 微孔板清洗機(jī)，觀察到了不到 5％ 的出色CV。
結(jié)論
Beacon Analytical Systems 公司的三聚氰胺平板試劑盒與 Molecular Devices 公司的 SpectraMax、VersaMax、VMax 和EMax 酶標(biāo)儀一起，提供了一種質(zhì)量保證的篩選解決方案，用于檢測食品中的三聚氰胺污染物，例如牛奶、奶粉、酸奶、小麥面筋以及潮濕和干燥的寵物食品。MolecularDevices 的 AquaMax 4000 微孔板清洗機(jī)可實(shí)現(xiàn) ELISA 清洗步驟的自動化，擁有出色的重現(xiàn)性，并可與 StakMax微孔板處理系統(tǒng)集成以提高通量。用戶還可以將StakMax 系統(tǒng)與 SpectraMax 和 VersaMax 酶標(biāo)儀一起配置，以更大程度地減少手動平板的操作。 完整的數(shù)據(jù)分析由符合FDA 21 CFR Part 11 的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)分析軟件SoftMax Pro GxP 提供。

• SpectraMaxiD5多功能微孔板讀板機(jī)酶標(biāo)儀

  檢測儀器在線詢價