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選擇轉(zhuǎn)染試劑重要參考因素2021/11/24: 研究人員可通過(guò)多種基因傳遞技術(shù)將質(zhì)粒DNA、sirna或者雙鏈RNAi、寡核苷酸和RNA轉(zhuǎn)入真核細(xì)胞中，應(yīng)用于各種研究和藥物開(kāi)發(fā)領(lǐng)域。下面介紹選擇轉(zhuǎn)染試劑重要參考因素：質(zhì)粒轉(zhuǎn)染：ThermoFisher可提供種類(lèi)齊全的陽(yáng)離子脂質(zhì)轉(zhuǎn)染試劑，產(chǎn)品性能出眾，可將質(zhì)粒轉(zhuǎn)入多種細(xì)胞中。RNAi轉(zhuǎn)染：RNA干擾（rnai）技術(shù)在生物學(xué)發(fā)現(xiàn)和驗(yàn)證領(lǐng)域掀起了一場(chǎng)革命。通過(guò)RNAI技術(shù)，可以“關(guān)閉”或降低基因表達(dá)，從而更好地了解該基因的功能及其在疾病中的作用。轉(zhuǎn)染是進(jìn)行有效基因沉默的步，也是*的一步。Thermo

使用血清時(shí)五個(gè)注意點(diǎn)2021/11/17: 使用血清的時(shí)候，注意下列的操作:1、凍結(jié)血清時(shí)，請(qǐng)按照所主張的逐步凍結(jié)法(-20℃至4℃至室溫)，若血清凍結(jié)時(shí)改變的溫度太大(如-20℃至37℃)，試驗(yàn)顯示十分簡(jiǎn)單發(fā)生沉淀物。2、凍結(jié)血清時(shí)，請(qǐng)隨時(shí)將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，削減沉淀的發(fā)生。3、請(qǐng)勿將血清置于37℃太久。若在37℃放置太久，血清會(huì)變得混濁，以致血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會(huì)因此遭到損害，而影響血清的質(zhì)量。4、血清的熱滅活十分簡(jiǎn)單形成沉淀物的增多，若非必要，能夠無(wú)須做此步驟。5、若有必要做血清的熱滅活，請(qǐng)恪守56℃，30分鐘的原

單抗制備融合后細(xì)胞不長(zhǎng)或融合后克隆很少的原因2021/11/08: 單抗制備為什么融合后細(xì)胞不長(zhǎng)或者融合后克隆很少？可以從這幾個(gè)方面考慮：1、免疫用的動(dòng)物品系不正確或者品系不純。免疫用的動(dòng)物一般應(yīng)該與骨髓瘤來(lái)源的動(dòng)物是相同品系，例如使用SP2/0骨髓瘤細(xì)胞時(shí)應(yīng)該選用Balb/C小鼠，同時(shí)必須使用品系純正的小鼠。2、培養(yǎng)基中加入了過(guò)高濃度的HAT，或者僅A的濃度過(guò)高或HT的濃度過(guò)低，建議用純的骨髓瘤和已有的雜交瘤作HAT濃度篩選。3、培養(yǎng)基不正確或血清濃度不正確或使用了劣質(zhì)血清。4、未正確制備飼養(yǎng)層細(xì)胞。參見(jiàn)本站有關(guān)飼養(yǎng)層細(xì)胞制備的部份。5、接種雜交瘤細(xì)胞的培養(yǎng)板

小鼠檢測(cè)試劑盒標(biāo)本收集及處理2021/11/03: 小鼠檢測(cè)試劑盒標(biāo)本的采集與保存：1、血清：將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置2小時(shí)或4oC過(guò)夜，然后1000×g離心20分鐘，取上清即可，或?qū)⑸锨逯糜?20oC或-80oC保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。2、血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本，并將標(biāo)本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8oC1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)⑸锨逯糜?20oC或-80oC保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。3、組織勻漿：1）、取適量組織塊，于預(yù)冷PBS（0.01mol/L,pH7.0-7.2）中清洗去除血液，稱(chēng)重后備用

一起了解抗原抗體那些事2021/10/26: 抗原：引起人體產(chǎn)生抗體的物質(zhì)叫做抗原。（1）抗原（antigen，縮寫(xiě)Ag）為任何可誘發(fā)免疫反應(yīng)的物質(zhì)。外來(lái)分子可經(jīng)過(guò)B細(xì)胞上免疫球蛋白的辨識(shí)或經(jīng)抗原呈現(xiàn)細(xì)胞的處理并與主要組織相容性復(fù)合體結(jié)合成復(fù)合物再活化T細(xì)胞，引發(fā)連續(xù)的免疫反應(yīng)。（2）抗原反應(yīng)所謂抗原的反應(yīng)原性是指能與由它刺激所產(chǎn)生的抗體或致敏淋巴細(xì)胞發(fā)生特異性反應(yīng)。具備免疫原性和反應(yīng)原性?xún)煞N能力的物質(zhì)稱(chēng)為*抗原，如病原體、異種動(dòng)物血清等。只具有反應(yīng)原性而沒(méi)有免疫原性的物質(zhì)，稱(chēng)為半抗原，如青霉素、磺胺等半抗原沒(méi)有免疫。原性，不會(huì)引起免疫反應(yīng)

PCR技術(shù)三個(gè)基本反應(yīng)步驟2021/10/20: 標(biāo)準(zhǔn)的PCR過(guò)程分為三步：第一步，DNA變性（90℃-96℃）雙鏈DNA在高溫作用下，氫鍵斷裂，形成單鏈DNA。第二步，退火（60℃-65℃）溫度降低，引物與DNA模板結(jié)合，形成局部雙鏈。第三步，延伸（70℃-75℃）在Taq酶的作用下，以dNTP為原料，從引物的3′端開(kāi)始以從5′到3′端的方向延伸，合成與模板互補(bǔ)的DNA鏈。每一循環(huán)經(jīng)過(guò)變性、退火和延伸，DNA含量即增加一倍。PCR由變性--退火--延伸三個(gè)基本反應(yīng)步驟構(gòu)成：模板DNA的變性模板DNA經(jīng)加熱至93℃左右一定時(shí)間后，使模板DNA雙

細(xì)胞培養(yǎng)一般條件2021/10/12: 簡(jiǎn)言之，即細(xì)胞需要什么就提供什么，道理是如此，真正能做到這點(diǎn)尚需時(shí)日，人們至今對(duì)細(xì)胞的生命周期控制機(jī)理認(rèn)識(shí)不足，癌細(xì)胞雖然也來(lái)自正常細(xì)胞，但至今不知道究竟為什么癌細(xì)胞很難停止已經(jīng)啟動(dòng)的有害分裂，盡管如此，人們長(zhǎng)期的研究結(jié)果表明，離體細(xì)胞培養(yǎng)需要的基本條件就是下列細(xì)胞生理?xiàng)l件。溫度溫度過(guò)低時(shí)細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢甚至不生長(zhǎng)。利用冷凍保藏細(xì)胞可保持細(xì)胞的原有分裂分化能力。溫度過(guò)高導(dǎo)致細(xì)胞死亡。這主要是由酶和蛋白質(zhì)所需要的最適溫度決定的。多數(shù)生物大分子遇到高溫后容易導(dǎo)致空間結(jié)構(gòu)改變或者喪失(變性)。細(xì)胞膜遇到高

PCR出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增的原因與對(duì)策2021/10/08: PCR出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增：PCR擴(kuò)增后出現(xiàn)的條帶與預(yù)計(jì)的大小不一致，或大或小，或者同時(shí)出現(xiàn)特異性擴(kuò)增帶與非特異性擴(kuò)增帶。（1）引物與靶序列不*互補(bǔ)或引物聚合形成二聚體。（2）Mg2+離子濃度過(guò)高。（3）退火溫度過(guò)低。（4）PCR循環(huán)次數(shù)過(guò)多有關(guān)。（5）酶的質(zhì)和量，往往一些來(lái)源的酶易出現(xiàn)非特異條帶而另一來(lái)源的酶則不出現(xiàn)，酶量過(guò)多有時(shí)也會(huì)出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增。其對(duì)策有：必要時(shí)重新設(shè)計(jì)引物。減低酶量或調(diào)換另一來(lái)源的酶。降低引物量，適當(dāng)增加模板量，減少循環(huán)次數(shù)。適當(dāng)提高退火溫度或采用二溫度點(diǎn)法（93℃變性，6

細(xì)胞的傳代培養(yǎng)常見(jiàn)問(wèn)題解答2021/09/27: 細(xì)胞傳代：細(xì)胞在培養(yǎng)過(guò)程中不斷增殖，培養(yǎng)皿/瓶空間有限，當(dāng)細(xì)胞接觸過(guò)密，生長(zhǎng)就會(huì)受到抑制，影響細(xì)胞狀態(tài)，因此我們要把其中一部分細(xì)胞分到別的培養(yǎng)皿/瓶里。常見(jiàn)問(wèn)題解答：Q：為什么我們總說(shuō)選擇對(duì)數(shù)期細(xì)胞傳代?A：如下圖：細(xì)胞的生長(zhǎng)和分裂，一般遵循以下模式：停滯期，對(duì)數(shù)期(指數(shù)期)，平穩(wěn)期(平臺(tái)期)和衰退期。為了確保活力，遺傳穩(wěn)定性和表型穩(wěn)定，必須使細(xì)胞保持在對(duì)數(shù)期。Q：那如何確定細(xì)胞對(duì)數(shù)期?A：根據(jù)上述細(xì)胞生長(zhǎng)曲線(xiàn)，為了確?；盍Γ仨毷辜?xì)胞保持在對(duì)數(shù)期就傳代，所以一定不能等到細(xì)胞長(zhǎng)滿(mǎn)100%融合時(shí)才

實(shí)驗(yàn)室10項(xiàng)安全管理規(guī)則2021/09/24: 實(shí)驗(yàn)室10項(xiàng)安全管理規(guī)則：1、實(shí)驗(yàn)室所有工作人嚴(yán)禁在實(shí)驗(yàn)室飲食（吃東西）、儲(chǔ)存食品/飲料等個(gè)人生活物品；嚴(yán)禁做與實(shí)驗(yàn)、研究無(wú)關(guān)的其他事情；2、所有實(shí)驗(yàn)室區(qū)域嚴(yán)禁吸煙，包括室內(nèi)、走廊、電梯間等區(qū)域；3、沒(méi)有經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)室管理部門(mén)或者相關(guān)管理人員允許，嚴(yán)禁將外人帶入實(shí)驗(yàn)室；4、所有實(shí)驗(yàn)室工作人都要熟悉緊急情況下的逃離路線(xiàn)和緊急應(yīng)對(duì)措施，比如急救箱、滅火器材、緊急洗眼裝置和沖淋器等位置；遇到突發(fā)且不能解決的問(wèn)題時(shí)，要盡快聯(lián)系急救電話(huà)119、120、110等；5、要時(shí)刻保持實(shí)驗(yàn)室門(mén)口和走道暢通，并最小化地存

穩(wěn)定細(xì)胞株篩選步驟方法2021/09/15: 穩(wěn)定細(xì)胞株已廣泛應(yīng)用于重組蛋白、抗體生產(chǎn)、檢測(cè)分析、免疫治療藥物開(kāi)發(fā)等研究領(lǐng)域。表達(dá)的蛋白/抗體穩(wěn)定性更好，批次間差異小，是生物醫(yī)藥研發(fā)的基礎(chǔ)。有時(shí)候，為了滿(mǎn)足細(xì)胞需求，我們會(huì)構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞株而不是瞬時(shí)轉(zhuǎn)染。相對(duì)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染而言，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染是指進(jìn)入細(xì)胞的質(zhì)粒整合入細(xì)胞基因組中，并能隨細(xì)胞分裂穩(wěn)定傳遞下去。穩(wěn)定細(xì)胞株篩選：方法一：先把質(zhì)粒整合到染色體上后，用相應(yīng)的質(zhì)粒DNA中的抗性標(biāo)志來(lái)篩選該細(xì)胞系，單克隆篩選穩(wěn)定細(xì)胞株。第一步：篩選濃度測(cè)定，以10~14天細(xì)胞全部死亡的抗生素濃度為篩選濃度；第二步：進(jìn)行

?講解酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）試驗(yàn)法2021/09/07: 酶聯(lián)免疫測(cè)定是將抗原抗體反響的高度特異性和酶的催化作用相結(jié)合，開(kāi)展建立一種非放射性符號(hào)免疫分析辦法。因?yàn)镋LISA具有靈敏度高、特異性強(qiáng)，酶免疫試劑的性質(zhì)比較穩(wěn)定，操作辦法簡(jiǎn)潔快速、無(wú)放射性污染以及應(yīng)用范圍廣等很多優(yōu)點(diǎn)，在醫(yī)學(xué)根底理論研究，病毒學(xué)和生物化學(xué)查驗(yàn)等工作中應(yīng)用十分廣泛。該法需將純化的抗原包被在固相載體，與必定稀釋度的待側(cè)血清反響，然后與酶符號(hào)的第二抗體（抗人IgG,IgA,IgM或抗人IgG.A.M的混合物）反響，酶可催化色原反響，在酶標(biāo)測(cè)定儀必定波長(zhǎng)下進(jìn)行比色，測(cè)定吸光度。ELIS

實(shí)驗(yàn)室其它源細(xì)胞使用注意事項(xiàng)2021/09/02: 其它源細(xì)胞注意事項(xiàng)：1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。4．請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值），請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)后乘以總稀

解析哪些要素影響抗原抗體反響？2021/08/24: 在常見(jiàn)實(shí)驗(yàn)?zāi)刂?，有很多不?dāng)操作情況下都會(huì)影響抗原—抗體反響的，以elisa試劑盒為例，為您解析：抗原—抗體結(jié)合進(jìn)程可分為兩個(gè)階段：一階段為特異性結(jié)合階段，此階段反響迅速，在數(shù)秒鐘至數(shù)分鐘內(nèi)完成，但無(wú)可見(jiàn)反響；第二階段為可見(jiàn)反響階段，歷時(shí)數(shù)分鐘至數(shù)小時(shí)，此階段易受以下要素的影響。一、電解質(zhì)抗原和抗體別離有對(duì)應(yīng)的極性基團(tuán)，能彼此吸附并由親水性變?yōu)槭杷?。電解質(zhì)的存在可使抗原—抗體復(fù)合物失掉電荷而凝聚，呈現(xiàn)可見(jiàn)反響。故免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)中多采用生理鹽水稀釋抗原或抗體。二、酸堿度抗原—抗體反響zui適pH值規(guī)模

胎牛血清*優(yōu)勢(shì)特點(diǎn)說(shuō)明2021/08/18: 胎牛血清（FoetalBovineSerum，簡(jiǎn)稱(chēng)FBS）：是采自5-8個(gè)月胎齡牛胚胎中的胎血。此時(shí)胎牛各臟器正處生長(zhǎng)分化階段，血中含有豐富的生長(zhǎng)發(fā)育因子，非常適合各種細(xì)胞的培養(yǎng)，一旦胚胎發(fā)育*這些因子自動(dòng)消失。因此8個(gè)月胎齡以上的牛胚胎，已接近足月，不能作為胎牛血清的原料來(lái)使用。胎牛血清*優(yōu)勢(shì)：1.精選內(nèi)毒素更低批次（≤3EU/ml），OriginalImport。是細(xì)胞典藏等重大項(xiàng)目十幾年的穩(wěn)定供應(yīng)品牌。2.新批次在試用前，提供試用服務(wù)，養(yǎng)細(xì)胞更放心。3.每個(gè)批次產(chǎn)量800-2000升，試用

ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)規(guī)則2021/08/04: ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)規(guī)則如下：1、要保證移液槍的準(zhǔn)確性，誤差不能超過(guò)2%。可用水和電子天平進(jìn)行確定。但最好有專(zhuān)業(yè)人員進(jìn)行矯正。2、要配備20ul、50ul、100ul、1000ul和排槍各一支。吸取不同的液體后，要更換槍頭。即使是吸取標(biāo)準(zhǔn)品時(shí)。3、要在實(shí)驗(yàn)前1小時(shí)將試劑盒從冰箱中取出，使各種試劑都恢復(fù)到室溫，以使結(jié)果更穩(wěn)定。4、實(shí)驗(yàn)時(shí)，要使底物避光保存。5、用槍吸取液體時(shí)速度不能太快，以免產(chǎn)生氣泡而使吸取量不準(zhǔn)確。6、吸取液體時(shí)，要用量程和需要量接近的槍去吸，減少誤差。7、將液體加到酶標(biāo)孔中時(shí)，

詳談ELISA試劑盒HRP底物分類(lèi)2021/07/28: ELISA試劑盒靈敏性判斷的話(huà)，因?yàn)楦鞣NELISA試劑盒的機(jī)能之間沒(méi)有明顯的水平差異，但是在InBios試劑盒檢測(cè)到的數(shù)據(jù)體現(xiàn)愈甚的原尺度低（P/N底物范圍較廣，包括二氨基聯(lián)苯胺(DAB)、氯萘酚和氨乙基咔唑等。HRP底物范圍較廣，包括二氨基聯(lián)苯胺(DAB)、氯萘酚和氨乙基咔唑等。一、二氨基聯(lián)苯胺／金屬鹽DAB是辣根過(guò)氧化物酶最敏感、常用的底物。它產(chǎn)生強(qiáng)烈的棕色產(chǎn)物，在水和醇中不溶解。多數(shù)情況下，推薦在DAB中加入不同的金屬離子。當(dāng)加入金屬鹽如鈷、鎳至底物液中，辣根過(guò)氧化物酶可以更加敏感。此類(lèi)反

細(xì)胞培育的操作過(guò)程2021/07/21: 細(xì)胞培育的操作過(guò)程：細(xì)胞培養(yǎng)也叫細(xì)胞克隆技術(shù)，在生物學(xué)中的正規(guī)名詞為細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。不論對(duì)于整個(gè)生物工程技術(shù)，還是其中之一的生物克隆技術(shù)來(lái)說(shuō)，細(xì)胞培養(yǎng)都是一個(gè)需要的過(guò)程，細(xì)胞培養(yǎng)本身就是細(xì)胞的大規(guī)?？寺?。細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)可以由一個(gè)細(xì)胞經(jīng)過(guò)大量培養(yǎng)成為簡(jiǎn)單的單細(xì)胞或極少分化的多細(xì)胞，這是克隆技術(shù)需要的環(huán)節(jié)，而且細(xì)胞培養(yǎng)本身就是細(xì)胞的克隆。通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)得到大量的細(xì)胞或其代謝產(chǎn)物。因?yàn)樯锂a(chǎn)品都是從細(xì)胞得來(lái)，所以可以說(shuō)細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是生物技術(shù)中最核心、最基礎(chǔ)的技術(shù)。一、細(xì)胞準(zhǔn)備工作準(zhǔn)備工作的內(nèi)容包括器皿的清洗

人ELISA檢測(cè)試劑盒五個(gè)基本原理2021/07/16: 酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)即將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面，使酶標(biāo)記的抗原抗體反應(yīng)在固相表面進(jìn)行的技術(shù)。該技術(shù)可用于檢測(cè)大分子抗原和特異性抗體等，具有快速、靈敏、簡(jiǎn)便、載體易于標(biāo)準(zhǔn)化等優(yōu)點(diǎn)。由于其試劑穩(wěn)定、易保存，操作簡(jiǎn)便，結(jié)果判斷較客觀等因素，已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)檢驗(yàn)的各領(lǐng)域中。人ELISA檢測(cè)試劑盒適用于體外定性檢測(cè)人血清或血漿中的抗人類(lèi)戊型肝炎（HEV）病毒IgM抗體ELISA檢測(cè)。人ELISA檢測(cè)試劑盒基本原理如下：1、將特定抗體（一抗）結(jié)合到某種固相載體表面，并保持其免疫性。一

細(xì)胞培養(yǎng)必須具備的四個(gè)環(huán)境因素2021/07/07: 1．無(wú)菌環(huán)境無(wú)毒和無(wú)菌是體外培養(yǎng)細(xì)胞的首要條件。細(xì)胞在活體內(nèi)，解毒系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)可抵抗微生物或其他有害物質(zhì)的入侵，但細(xì)胞在體外培養(yǎng)的過(guò)程中，缺乏機(jī)體免疫系統(tǒng)的保護(hù)而喪失對(duì)微生物的防御能力和對(duì)有害物質(zhì)的解毒能力。為保證細(xì)胞能在體外環(huán)境中生長(zhǎng)繁殖，必須要確保無(wú)菌工作區(qū)域、良好的個(gè)人衛(wèi)生、無(wú)菌試劑和培養(yǎng)基以及無(wú)菌操作。常見(jiàn)的微生物污染有支原體、細(xì)菌、真菌。支原體無(wú)致死毒性，可與細(xì)胞長(zhǎng)期共存，對(duì)細(xì)胞有潛在影響，但體積小，不易鑒別，可借助于地衣紅或Hoechst33342染色來(lái)進(jìn)行檢測(cè)。細(xì)菌增殖快，在短時(shí)

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