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產(chǎn)品中文: | 大鼠煙堿型乙酰*受體(N-AChR)ELISA試劑盒 | |||||||
產(chǎn)品英文: | Rat nicotinic acetylcholine receptor,N-AChR ELISA KIT | |||||||
ELISA技術(shù)原理:以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ),將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對底物的高效催化作用相結(jié)合起來. | ||||||||
1. 抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。 | ||||||||
2. 結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性。 | ||||||||
3. 酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性,又保留酶的活性。 | ||||||||
4. 受檢標本與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。再加入酶標記 的抗原或抗體,也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。 | ||||||||
5. 此時固相上的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。 | ||||||||
6. 加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量 與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),故可根據(jù)呈色的深淺進行定 性或定量分析。測定方法具有很高的敏感度(pg-ng/ml水 平),并且重復(fù)性好。 | ||||||||
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樣本處理及要求: | ||||||||
ELISA 的樣本實驗準備 在收集樣本前都必須有一個完整的計劃,必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。對收集后當 天就進行 檢測的樣本,及時儲存在 4℃?zhèn)溆?。對于隔天再檢測的樣本,及時分裝后凍存在-20℃?zhèn)溆茫?nbsp;有條件的,-70℃凍存?zhèn)溆?。標本?yīng)避免反復(fù)凍融。 | ||||||||
1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。 | ||||||||
2. 血漿:應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。 | ||||||||
3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。 | ||||||||
4. 細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。 | ||||||||
5. 組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩吮救诨笕匀槐3?-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。 | ||||||||
6. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融. | ||||||||
7. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。 | ||||||||
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操作步驟 | ||||||||
1. 標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設(shè)標準品孔10孔,在*、第二孔中分別加標準品100μl,然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為30ng/L,20ng/L ,10ng/L,5ng/L, 2.5ng/L)。 | ||||||||
2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。 | ||||||||
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。 | ||||||||
4. 配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。 | ||||||||
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。 | ||||||||
6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。 | ||||||||
7. 溫育:操作同3。 | ||||||||
8. 洗滌:操作同5。 | ||||||||
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘. | ||||||||
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。 | ||||||||
11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。 | ||||||||
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注意事項: | ||||||||
1. 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。 | ||||||||
2. 濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。 | ||||||||
3. 各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,*使用排槍加樣。 | ||||||||
4. 請每次測定的同時做標準曲線,做復(fù)孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。 | ||||||||
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。 | ||||||||
6. 底物請避光保存。 | ||||||||
7. 嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準. | ||||||||
8. 所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。 | ||||||||
9. 本試劑不同批號組分不得混用。 | ||||||||
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XF01945B | 大鼠抗增殖細胞核抗原抗體(PCNA)ELISA試劑盒 | |||||||
XF01946B | 大鼠脂蛋白脂酶(LPL)ELISA試劑盒 | |||||||
XF01947B | 大鼠抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP-5b)ELISA試劑盒 | |||||||
XF01948B | 大鼠葡萄糖依賴性胰島素釋放多肽(GIP)ELISA試劑盒 | |||||||
XF01949B | 大鼠糖原磷酸化酶同工酶II(GP-II)ELISA試劑盒 | |||||||
XF01950B | 大鼠糖原磷酸化酶同工酶MM(GP-MM)ELISA試劑盒 | |||||||
XF01951B | 大鼠糖原磷酸化酶同工酶BB(GP-BB)ELISA試劑盒 | |||||||
XF01952B | 大鼠甲狀腺素抗體(TAb)ELISA試劑盒 | |||||||
XF01953B | 大鼠抗促甲狀腺素受體抗體(TRAb)ELISA試劑盒 | |||||||
XF01954B | 大鼠兒茶酚胺(CA)ELISA試劑盒 | |||||||
XF01955B | 大鼠白介素23(IL-23)ELISA試劑盒 | |||||||
XF01956B | 大鼠心肌營養(yǎng)素1(CT-1)ELISA試劑盒 | |||||||
XF01957B | 大鼠抗α-胞襯蛋白抗體IgG/IgA(α-Fodrin IgG/IgA)ELISA試劑盒 | |||||||
XF01958B | 大鼠脂蛋白α(Lp-α)ELISA試劑盒 | |||||||
XF01959B | 大鼠*Ⅷ相關(guān)抗原(FⅧ-Ag)ELISA試劑盒 | |||||||
XF01960B | 大鼠*IX(FIX)ELISA試劑盒 | |||||||
XF01961B | 大鼠*Ⅹ(FⅩ)ELISA試劑盒 | |||||||
XF01962B | 大鼠血管性血友病因子/瑞斯托霉素輔因子(VWF)ELISA試劑盒 | |||||||
XF01963B | 大鼠纖溶酶抗纖溶酶復(fù)合物(PAP)ELISA試劑盒 | |||||||