NCTC克隆929 , L129細(xì)胞5×10^5以上/1ml
對于大多數(shù)細(xì)胞研究工作者來說，NCTC克隆929 , L129細(xì)胞污染那可是個糟糕的事情，也是比較容易出現(xiàn)的情況，我們?nèi)绾畏婪?，如何避免，是我們要學(xué)習(xí)和掌握的。
胞外超氧化物歧化酶（SOD3）檢測試劑盒（化學(xué)發(fā)光免疫分析法） CLIA Kit for Superoxide Dismutase 3, Extracellular （SOD3） Mus musculus （Mouse）
組蛋白H4（H4）檢測試劑盒（化學(xué)發(fā)光免疫分析法） CLIA Kit for Histone H4 （H4） Mus musculus （Mouse）
半乳糖凝集素9（GAL9）檢測試劑盒（化學(xué)發(fā)光免疫分析法） CLIA Kit for Galectin 9 （GAL9） Homo sapiens （Human）
NCTC克隆929 , L129細(xì)胞補(bǔ)體成分5a（C5a）檢測試劑盒（化學(xué)發(fā)光免疫分析法） CLIA Kit for Complement Component 5a （C5a） Rattus norvegicus （Rat）
雌激素受體β（ERβ）檢測試劑盒（化學(xué)發(fā)光免疫分析法） CLIA Kit for Estrogen Receptor Beta （ERb） Homo sapiens （Human）
下面我們對細(xì)胞培養(yǎng)中常見的污染情況，做個總結(jié)：
1）原蟲：培養(yǎng)液可輕微渾濁，顯微鏡下那些細(xì)小的點(diǎn)狀物數(shù)量非常多，輕微活動，細(xì)胞雖然可以生長但繁殖速度卻明顯減慢，而且細(xì)胞狀態(tài)不好，邊緣不清楚，細(xì)胞不透亮。他們與細(xì)胞可共生但會與細(xì)胞爭奪營養(yǎng)。這種共生是非常普遍的，但他們的數(shù)量小，細(xì)胞站優(yōu)勢所以不會影響到細(xì)胞的正常生長，只有當(dāng)他們到達(dá)一定的數(shù)量時就會影響到細(xì)胞的生長，zui終形成惡性循環(huán)。
2）霉菌：培養(yǎng)液是清亮的，倒置顯微鏡下無雜質(zhì)，37度孵箱培養(yǎng)2-3天，仍清亮，但出現(xiàn)絮狀雜質(zhì)，鏡下可見呈細(xì)絲狀的團(tuán)狀漂浮物，可看到明顯的菌絲，細(xì)胞仍可生長，但時間長之后，細(xì)胞的活力狀態(tài)變差，用硫酸銅溶液擦拭CO2孵箱內(nèi)，再把水盤里也加上飽和量的硫酸銅?；蛘咴谂囵B(yǎng)箱的托盤加入飽和的消毒*高鹽液體,可以防止霉菌污染。CO2孵箱被霉菌污染后，可把所有細(xì)胞暫時轉(zhuǎn)移，采用過氧乙酸擦洗孵箱（包括隔板，箱壁）。并把過氧乙酸放置在孵箱內(nèi)一個小時，使其蒸汽彌漫。待過氧乙酸的氣味消散后，再移入細(xì)胞。孵箱應(yīng)定期清潔（2月左右），尤其在多雨的季節(jié)。其它培養(yǎng)箱清洗方法是：用84液擦洗－清水擦洗－75%酒精擦洗－紫外燈照。預(yù)防霉菌污染，可在培養(yǎng)基里加3u/ml的兩性霉素或*或*或雙抗；但細(xì)胞一旦污染，很難挽救，*或*或雙抗都于事無補(bǔ)，建議舍棄該污染細(xì)胞。，將環(huán)境*消毒，如果所有細(xì)胞都污染，可能是系統(tǒng)污染，檢查一下培養(yǎng)基和器材，如果只是個別污染，可能是操作問題，就要注意操作。
3）細(xì)菌：細(xì)菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細(xì)沙狀，根據(jù)感染細(xì)菌的不同，可有不同的外形，培養(yǎng)液一般會渾濁變黃，對細(xì)胞生長影響明顯。仔細(xì)檢查一下器皿的滅菌情況，是否在高壓滅菌時放氣時間足夠，壓力足夠！尤其是和儲存培養(yǎng)液接觸的移液管等物品，連續(xù)兩次污染的話有可能造成儲存液污染，一定要注意！下次使用前檢查一下培養(yǎng)液是否存在渾濁的現(xiàn)象！ 可在培養(yǎng)液中加相應(yīng)的抗生素處理
4）黑蛟蟲：可以穿透濾膜，也可以通過空氣傳播，低倍下為黑色點(diǎn)狀，高倍下可看見黑色的小蟲游來游去，培養(yǎng)液也是不渾的，一般不會太影響，細(xì)胞還是可以用的。常常是細(xì)胞生長狀態(tài)良好，且觀測到的運(yùn)動物無明顯增多，且培養(yǎng)液顏色、透明度無明顯變化，可在同一批號的血清養(yǎng)的細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)類似現(xiàn)象。對細(xì)胞生長狀態(tài)不會有明顯影響，在細(xì)胞增殖旺盛之后會自然消失，除更換血清外無須特殊處理。建議如果細(xì)胞有可能是此種污染的話，可以增加細(xì)胞的種板密度，以提高細(xì)胞的生存率。
5）真菌：一般培養(yǎng)液清亮，不變色，鏡下有絲狀物，有些真菌開始很像死細(xì)胞碎片，只是它很多很多的小塊很清楚，象珊瑚狀，不象細(xì)胞碎片分不清，慢慢的會長出很細(xì)的黑色絲狀物。真菌生長的比較慢，不象細(xì)菌那么容易被發(fā)現(xiàn)，但是一旦發(fā)現(xiàn)有它的存在細(xì)胞就被污染了，也很難救活了。
6）支原體：黑色的，好象多為多形，培養(yǎng)液一般培養(yǎng)液一般會渾濁，原體感染，國內(nèi)血清很多都沒有做支原體陰性檢測，而支原體是牛血清中zui常見的微生物之一。而且它不能用過濾的辦法除去。支原體感染細(xì)胞以后，細(xì)胞病變不很明顯，只是慢慢死去。用泰樂菌素，獸用支原體病的藥，但可用于細(xì)胞培養(yǎng)，無任何不良反應(yīng)。Sigma公司的使用時用50ug/ml Tylosin培養(yǎng)液培養(yǎng)6天或連續(xù)傳兩代即可清除支原體污染。如果作為常用的抗生素的話, 建議用8ug/ml的濃度。
污染的可能原因：可能原因很多比如配液消毒問題、操作問題、環(huán)境問題等等關(guān)于培養(yǎng)基的無菌狀況，取培養(yǎng)基至培養(yǎng)瓶中（不加細(xì)胞），37度試培養(yǎng)一段時間后觀察。如果沒有細(xì)菌生長就是操作的問題。 也可以在培養(yǎng)基中事先加入雙抗（*和氨芐*）。但雙抗有時會影響細(xì)胞的狀態(tài)，所以在做轉(zhuǎn)染、檢測細(xì)胞某項指標(biāo)前一定要撤去雙抗，以避免影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。1、孵箱應(yīng)定期用三氧機(jī)消毒或者 紫外光照射，并用酒精和新潔爾滅試擦孵箱同時孵箱內(nèi)的水應(yīng)是三蒸水2、超凈臺\取材\器材\培養(yǎng)液\培養(yǎng)瓶\操作等因素3、超凈臺的風(fēng)機(jī)不能過大，風(fēng)機(jī)到6-8格。否則也可能能致霉菌污染4、無菌室經(jīng)甲醛熏蒸消毒后，可用同等量的氨水噴灑中和，約幾小時即可進(jìn)入操作。
氨基端前腦鈉素（NT-ProBNP）檢測試劑盒（化學(xué)發(fā)光免疫分析法） CLIA Kit for N-Terminal Pro Brain Natriuretic Peptide （NT-ProBNP） Canis familiaris; Canine （Dog）
Ⅰ型前膠原羧基端原肽（PⅠCP）檢測試劑盒（化學(xué)發(fā)光免疫分析法） CLIA Kit for Procollagen I C-Terminal Propeptide （PICP） Homo sapiens （Human）
血小板反應(yīng)蛋白（THBS1）檢測試劑盒（化學(xué)發(fā)光免疫分析法） CLIA Kit for Thrombospondin 1 （THBS1） Mus musculus （Mouse）
分泌型免疫球蛋白A（sIgA）檢測試劑盒（化學(xué)發(fā)光免疫分析法） CLIA Kit for Secretory Immunoglobulin A （sIgA） Bos taurus; Bovine （Cattle）
轉(zhuǎn)甲狀腺素蛋白（TTR）檢測試劑盒（化學(xué)發(fā)光免疫分析法） CLIA Kit for Transthyretin （TTR） Homo sapiens （Human）
生長分化因子11（GDF11）檢測試劑盒（化學(xué)發(fā)光免疫分析法） CLIA Kit for Growth Differentiation Factor 11 （GDF11） Homo sapiens （Human）
C4結(jié)合蛋白β（C4BPβ）檢測試劑盒（化學(xué)發(fā)光免疫分析法） CLIA Kit for C4 Binding Protein Beta （C4BPb） Homo sapiens （Human）
補(bǔ)體因子P（CFP）檢測試劑盒（化學(xué)發(fā)光免疫分析法） CLIA Kit for Complement Factor P （CFP） Homo sapiens （Human）
生長分化因子11（GDF11）檢測試劑盒（化學(xué)發(fā)光免疫分析法） CLIA Kit for Growth Differentiation Factor 11 （GDF11） Mus musculus （Mouse）
核因子κB受體激活因子配基（RANκL）檢測試劑盒（化學(xué)發(fā)光免疫分析法） CLIA Kit for Receptor Activator Of Nuclear Factor Kappa B Ligand （RANkL） Rattus norvegicus （Rat）
補(bǔ)體成分1r（C1r）檢測試劑盒（化學(xué)發(fā)光免疫分析法） CLIA Kit for Complement Component 1, R Subcomponent （C1r） Homo sapiens （Human）
生長調(diào)節(jié)致癌基因β（GROβ）檢測試劑盒（化學(xué)發(fā)光免疫分析法） CLIA Kit for Growth Regulated Oncogene Beta （GROb） Homo sapiens （Human）
補(bǔ)體成分1s（C1s）檢測試劑盒（化學(xué)發(fā)光免疫分析法） CLIA Kit for Complement Component 1, S Subcomponent （C1s） Homo sapiens （Human）
補(bǔ)體成分8γ（C8γ）檢測試劑盒（化學(xué)發(fā)光免疫分析法） CLIA Kit for Complement Component 8g （C8g） Homo sapiens （Human）
*水解酶（BLMH）檢測試劑盒（化學(xué)發(fā)光免疫分析法） CLIA Kit for Bleomycin Hydrolase （BLMH） Homo sapiens （Human）
前梯度蛋白2（AGR2）檢測試劑盒（化學(xué)發(fā)光免疫分析法） CLIA Kit for Anterior Gradient Protein 2 （AGR2） Homo sapiens （Human）
絡(luò)絲蛋白（RL）檢測試劑盒（化學(xué)發(fā)光免疫分析法） CLIA Kit for Reelin （RL） Rattus norvegicus （Rat）
甲狀腺激素反應(yīng)基因（THRSP）檢測試劑盒（化學(xué)發(fā)光免疫分析法） CLIA Kit for Thyroid Hormone Responsive （THRSP） Homo sapiens （Human）