中國倉鼠卵巢細(xì)胞系 , CHO-K1細(xì)胞5×10^5以上/1ml
對于大多數(shù)細(xì)胞研究工作者來說,中國倉鼠卵巢細(xì)胞系 , CHO-K1細(xì)胞污染那可是個糟糕的事情,也是比較容易出現(xiàn)的情況,我們?nèi)绾畏婪?,如何避免,是我們要學(xué)習(xí)和掌握的。
人B因子(BF)ELISA試劑盒 Human factor B,BF ELISA KIT 96T/48T
人類白細(xì)胞抗原G(HLA-G)ELISA試劑盒 Human leukocyte antigen G,HLA-G ELISA KIT 96T/48T
人補(bǔ)體片斷3b(C3b)ELISA試劑盒 Human Complement fragment 3b,C3b ELISA KIT 96T/48T
中國倉鼠卵巢細(xì)胞系 , CHO-K1細(xì)胞人補(bǔ)體片斷4b(C4b)ELISA試劑盒 Human Complement fragment 4b,C4b ELISA KIT 96T/48T
人補(bǔ)體片斷5b(C5b)ELISA試劑盒 Human Complement fragment 5b,C5b ELISA KIT 96T/48T
*重鏈(IgH)ELISA試劑盒 Human immunoglobulin heavy chain,IgH ELISA KIT 96T/48T
*重鏈可變區(qū)(IgHV)ELISA試劑盒 Human immunoglobulin heavy chain variable region,IgHV ELISA KIT 96T/48T
下面我們對細(xì)胞培養(yǎng)中常見的污染情況,做個總結(jié):
1)原蟲:培養(yǎng)液可輕微渾濁,顯微鏡下那些細(xì)小的點狀物數(shù)量非常多,輕微活動,細(xì)胞雖然可以生長但繁殖速度卻明顯減慢,而且細(xì)胞狀態(tài)不好,邊緣不清楚,細(xì)胞不透亮。他們與細(xì)胞可共生但會與細(xì)胞爭奪營養(yǎng)。這種共生是非常普遍的,但他們的數(shù)量小,細(xì)胞站優(yōu)勢所以不會影響到細(xì)胞的正常生長,只有當(dāng)他們到達(dá)一定的數(shù)量時就會影響到細(xì)胞的生長,zui終形成惡性循環(huán)。
2)霉菌:培養(yǎng)液是清亮的,倒置顯微鏡下無雜質(zhì),37度孵箱培養(yǎng)2-3天,仍清亮,但出現(xiàn)絮狀雜質(zhì),鏡下可見呈細(xì)絲狀的團(tuán)狀漂浮物,可看到明顯的菌絲,細(xì)胞仍可生長,但時間長之后,細(xì)胞的活力狀態(tài)變差,用硫酸銅溶液擦拭CO2孵箱內(nèi),再把水盤里也加上飽和量的硫酸銅。或者在培養(yǎng)箱的托盤加入飽和的消毒*高鹽液體,可以防止霉菌污染。CO2孵箱被霉菌污染后,可把所有細(xì)胞暫時轉(zhuǎn)移,采用過氧乙酸擦洗孵箱(包括隔板,箱壁)。并把過氧乙酸放置在孵箱內(nèi)一個小時,使其蒸汽彌漫。待過氧乙酸的氣味消散后,再移入細(xì)胞。孵箱應(yīng)定期清潔(2月左右),尤其在多雨的季節(jié)。其它培養(yǎng)箱清洗方法是:用84液擦洗-清水擦洗-75%酒精擦洗-紫外燈照。預(yù)防霉菌污染,可在培養(yǎng)基里加3u/ml的兩性霉素或*或*或雙抗;但細(xì)胞一旦污染,很難挽救,*或*或雙抗都于事無補(bǔ),建議舍棄該污染細(xì)胞。,將環(huán)境*消毒,如果所有細(xì)胞都污染,可能是系統(tǒng)污染,檢查一下培養(yǎng)基和器材,如果只是個別污染,可能是操作問題,就要注意操作。
3)細(xì)菌:細(xì)菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細(xì)沙狀,根據(jù)感染細(xì)菌的不同,可有不同的外形,培養(yǎng)液一般會渾濁變黃,對細(xì)胞生長影響明顯。仔細(xì)檢查一下器皿的滅菌情況,是否在高壓滅菌時放氣時間足夠,壓力足夠!尤其是和儲存培養(yǎng)液接觸的移液管等物品,連續(xù)兩次污染的話有可能造成儲存液污染,一定要注意!下次使用前檢查一下培養(yǎng)液是否存在渾濁的現(xiàn)象! 可在培養(yǎng)液中加相應(yīng)的抗生素處理
4)黑蛟蟲:可以穿透濾膜,也可以通過空氣傳播,低倍下為黑色點狀,高倍下可看見黑色的小蟲游來游去,培養(yǎng)液也是不渾的,一般不會太影響,細(xì)胞還是可以用的。常常是細(xì)胞生長狀態(tài)良好,且觀測到的運動物無明顯增多,且培養(yǎng)液顏色、透明度無明顯變化,可在同一批號的血清養(yǎng)的細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)類似現(xiàn)象。對細(xì)胞生長狀態(tài)不會有明顯影響,在細(xì)胞增殖旺盛之后會自然消失,除更換血清外無須特殊處理。建議如果細(xì)胞有可能是此種污染的話,可以增加細(xì)胞的種板密度,以提高細(xì)胞的生存率。
5)真菌:一般培養(yǎng)液清亮,不變色,鏡下有絲狀物,有些真菌開始很像死細(xì)胞碎片,只是它很多很多的小塊很清楚,象珊瑚狀,不象細(xì)胞碎片分不清,慢慢的會長出很細(xì)的黑色絲狀物。真菌生長的比較慢,不象細(xì)菌那么容易被發(fā)現(xiàn),但是一旦發(fā)現(xiàn)有它的存在細(xì)胞就被污染了,也很難救活了。
6)支原體:黑色的,好象多為多形,培養(yǎng)液一般培養(yǎng)液一般會渾濁,原體感染,國內(nèi)血清很多都沒有做支原體陰性檢測,而支原體是牛血清中zui常見的微生物之一。而且它不能用過濾的辦法除去。支原體感染細(xì)胞以后,細(xì)胞病變不很明顯,只是慢慢死去。用泰樂菌素,獸用支原體病的藥,但可用于細(xì)胞培養(yǎng),無任何不良反應(yīng)。Sigma公司的使用時用50ug/ml Tylosin培養(yǎng)液培養(yǎng)6天或連續(xù)傳兩代即可清除支原體污染。如果作為常用的抗生素的話, 建議用8ug/ml的濃度。
污染的可能原因:可能原因很多比如配液消毒問題、操作問題、環(huán)境問題等等關(guān)于培養(yǎng)基的無菌狀況,取培養(yǎng)基至培養(yǎng)瓶中(不加細(xì)胞),37度試培養(yǎng)一段時間后觀察。如果沒有細(xì)菌生長就是操作的問題。 也可以在培養(yǎng)基中事先加入雙抗(*和氨芐*)。但雙抗有時會影響細(xì)胞的狀態(tài),所以在做轉(zhuǎn)染、檢測細(xì)胞某項指標(biāo)前一定要撤去雙抗,以避免影響實驗結(jié)果。1、孵箱應(yīng)定期用三氧機(jī)消毒或者 紫外光照射,并用酒精和新潔爾滅試擦孵箱同時孵箱內(nèi)的水應(yīng)是三蒸水2、超凈臺\取材\器材\培養(yǎng)液\培養(yǎng)瓶\操作等因素3、超凈臺的風(fēng)機(jī)不能過大,風(fēng)機(jī)到6-8格。否則也可能能致霉菌污染4、無菌室經(jīng)甲醛熏蒸消毒后,可用同等量的氨水噴灑中和,約幾小時即可進(jìn)入操作。
人游離血紅蛋白(f-Hb)ELISA試劑盒 Human free haemoglobin,f-Hb ELISA KIT 96T/48T
人*1(PRM1)ELISA試劑盒 Human Protamine 1,PRM1 ELISA KIT 96T/48T
人一氧化碳血紅蛋白(HbCO)ELISA試劑盒 Human carboxyhemoglobin,HbCO ELISA KIT 96T/48T
人血小板相關(guān)免疫球蛋白(PAIg)ELISA試劑盒 Human plaet-associated immunoglobulins,PAIg ELISA KIT 96T/48T
人血小板相關(guān)補(bǔ)體3(PAC3)ELISA試劑盒 Human plaet-associated Complement 3,PAC3 ELISA KIT 96T/48T
人血栓素A2(TX-A2)ELISA試劑盒 Human Thromboxane A2,TX-A2 ELISA KIT 96T/48T
人血紅蛋白H(HbH)ELISA試劑盒 Human Hemoglobin H,HbH ELISA KIT 96T/48T
人血紅蛋白C(HbC)ELISA試劑盒 Human Hemoglobin C,HbC ELISA KIT 96T/48T
人纖維蛋白(Fibrin)ELISA試劑盒 Human Fibrin ELISA KIT 96T/48T
人血纖肽/纖維蛋白肽B(FPB)ELISA試劑盒 Human fibrinopeptide B,FPB ELISA KIT 96T/48T
人纖溶酶原激活劑(PLGA)ELISA試劑盒 Human plasminogen activator,PLGA ELISA KIT 96T/48T
人細(xì)胞膜表面免疫球蛋白(SmIg)ELISA試劑盒 Human Surface Membrane Immunoglobulin,SmIg ELISA KIT 96T/48T
人前白蛋白(PA)ELISA試劑盒 Human prealbumin,PA ELISA KIT 96T/48T
人冷球蛋白(CG)ELISA試劑盒 Human Cryoglobulin,CG ELISA KIT 96T/48T
人紅細(xì)胞膜蛋白(EMP)ELISA試劑盒 Human erythrocyte membrane protein,EMP ELISA KIT 96T/48T
人高鐵血紅蛋白(MHB)ELISA試劑盒 Human Methemoglobin,MHB ELISA KIT 96T/48T
人低分子肝素(LMWH)ELISA試劑盒 Human low molecular weight heparin,LMWH ELISA KIT 96T/48T
人補(bǔ)體3裂解產(chǎn)物(C3SP)ELISA試劑盒 Human Complement 3 split product,C3SP ELISA KIT 96T/48T
人補(bǔ)體片段3b受體(C3bR)ELISA試劑盒 Human Complement fragment 3b rccptor,C3bR ELISA KIT 96T/48T
人補(bǔ)體1抑制物抗體(C1INH)ELISA試劑盒 Human Complement 1 inhibitor autoantibody,C1INH ELISA KIT 96T/48T