高性能制備型液相色譜儀是一種用于將混合物中的目標(biāo)化合物分離、純化并制備出一定量高純度樣品的儀器,在化學(xué)、生物學(xué)、制藥等多個(gè)領(lǐng)域有著廣泛應(yīng)用。以下是其相關(guān)介紹:
一、工作原理
利用不同化合物在固定相和流動(dòng)相之間的分配系數(shù)差異,當(dāng)樣品隨著流動(dòng)相通過(guò)裝有固定相的色譜柱時(shí),各化合物在兩相之間進(jìn)行反復(fù)多次分配,從而使不同化合物得到分離,再通過(guò)檢測(cè)器對(duì)分離后的化合物進(jìn)行檢測(cè),根據(jù)檢測(cè)信號(hào)收集目標(biāo)化合物的餾分。
二、系統(tǒng)組成
1.溶劑系統(tǒng):包括多個(gè)溶劑儲(chǔ)罐,用于存放不同的流動(dòng)相溶劑,如甲醇、乙腈、水以及各種緩沖溶液等。
2.輸液泵:為流動(dòng)相提供穩(wěn)定的驅(qū)動(dòng)力,使流動(dòng)相能夠以設(shè)定的流速通過(guò)色譜柱。一般采用雙柱塞往復(fù)泵,具有流量準(zhǔn)確、脈動(dòng)小等特點(diǎn)。
3.進(jìn)樣器:分析型液相和小規(guī)模的制備型液相通常使用六通閥進(jìn)樣,更大規(guī)模的制備液相為了消除峰的拖尾現(xiàn)象會(huì)使用泵進(jìn)樣。
4.色譜柱:是實(shí)現(xiàn)樣品分離的核心部件,由柱管和固定相組成。制備型液相色譜儀的色譜柱內(nèi)徑通常比分析型色譜柱大,以滿足大樣品量的分離需求。
5.檢測(cè)器:常用的是紫外可見光檢測(cè)器,樣品需在可見或紫外光區(qū)有吸收。示差折光檢測(cè)器也較為常用,是連續(xù)檢測(cè)樣品流路與參比流路間液體折光指數(shù)差值的檢測(cè)器。
6.餾分收集器:可按多種收集模式自動(dòng)收集所需餾分,代替手工操作,提高工作效率。
三、主要特點(diǎn)
1.大體積進(jìn)樣:能夠處理較大體積的樣品,進(jìn)樣量通常比分析型液相色譜儀大得多,可從幾十微升到數(shù)毫升甚至更大。
2.高流速:配備的輸液泵可提供較高的流速,一般在 100 - 3200ml/min,以滿足制備規(guī)模對(duì)分離速度的要求。
3.可獲得大量高純樣品:通過(guò)優(yōu)化分離條件和使用合適的色譜柱,能夠從復(fù)雜的混合物中分離出高純度的目標(biāo)化合物,滿足后續(xù)實(shí)驗(yàn)或生產(chǎn)對(duì)樣品純度的要求。
四、應(yīng)用領(lǐng)域
1.天然藥物化學(xué)和中藥化學(xué):用于分離和純化植物中的有效成分,如生物堿、黃酮類、萜類等化合物,有助于研究天然藥物的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)和開發(fā)新藥。
2.蛋白純化:在生物制藥和蛋白質(zhì)研究中,用于分離和純化各種蛋白質(zhì)、多肽等生物大分子,為蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能研究、藥物研發(fā)等提供高質(zhì)量的樣品。
3.藥物雜質(zhì)純化:在藥物研發(fā)和生產(chǎn)過(guò)程中,可用于分離和制備藥物中的微量雜質(zhì),以便對(duì)雜質(zhì)進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定和含量測(cè)定,從而控制藥物質(zhì)量。
4.手性化合物的制備:在有機(jī)合成和藥物研發(fā)中,對(duì)于手性化合物的分離和制備具有重要作用,可獲得單一手性構(gòu)型的化合物,用于研究其生物活性和藥理作用。