美國(guó)BTX公司自1983年成立以來(lái),以電穿孔儀、電融合儀為主要產(chǎn)品,是*家生產(chǎn)高質(zhì)量電穿孔儀器的生產(chǎn)廠家,開(kāi)創(chuàng)了許多在電穿孔、電融合、轉(zhuǎn)染、轉(zhuǎn)化等方面的產(chǎn)品和技術(shù),不僅為在此領(lǐng)域的研究者提供了BTX專業(yè)產(chǎn)品,而且擁有多至25種的配件,包括:電穿孔、電融合、活體導(dǎo)入配件等等,成為*專業(yè)的轉(zhuǎn)基因、電融合、活體轉(zhuǎn)基因儀及配件的生產(chǎn)廠家。
ECM® 399 是一款指數(shù)衰減波電穿孔系統(tǒng),其提供的電場(chǎng)強(qiáng)度和脈沖強(qiáng)度是專為細(xì)菌和酵母的簡(jiǎn)單轉(zhuǎn)化而設(shè)計(jì)的。在低壓模式中,ECM®399也可以運(yùn)用于部分哺乳動(dòng)物細(xì)胞實(shí)驗(yàn),是科研和教學(xué)中基本轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)的理想選擇,操作簡(jiǎn)單,易學(xué)易用(開(kāi)機(jī)、設(shè)定電壓、放電),經(jīng)濟(jì)實(shí)惠,一體化設(shè)計(jì),便于攜帶。
可操作性 高、低壓模式,電壓精確可調(diào)
監(jiān)控顯示 液晶屏幕高分辨率顯示電壓峰值、儀器狀態(tài)
安全性能 電弧淬滅功能,短路保護(hù)。
兼容性 PEP,安全臺(tái),35mm培養(yǎng)皿電極
技術(shù)參數(shù) | ||
高壓模式 | 電壓 | 10-2500V,10V調(diào)進(jìn) |
電阻 | 150Ω | |
電容 | 36μF | |
低壓模式 | 電壓 | 2-500V,2V調(diào)進(jìn) |
電阻 | 151Ω | |
電容 | 1050μF |
一、 儀器的安全性注意事項(xiàng)
1. 在工作場(chǎng)所提供合適的電源座,位置遠(yuǎn)離有水環(huán)境,忌在爆炸物或在可傳導(dǎo)的污染環(huán)境里工作。
2. 由于儀器是熱啟動(dòng)裝置,在夏天開(kāi)機(jī)后需預(yù)熱20min以蒸發(fā)內(nèi)部水蒸氣,且在每次使用完畢后將電源開(kāi)關(guān)及電源線拔掉以確保安全。
3. 一個(gè)人操作儀器以避免不協(xié)同對(duì)儀器造成損壞。
4. 操作儀器前,將樣品準(zhǔn)備之后再連接線路以及開(kāi)機(jī)。
5. 操作池蓋合上才可以操作,忌輕易觸摸內(nèi)部金屬片。
二、 試驗(yàn)操作安全性
實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程中不可避免會(huì)出現(xiàn)擊穿現(xiàn)象,會(huì)對(duì)儀器造成很大損傷,原因有很多。為較好地維護(hù)儀器,每次實(shí)驗(yàn)時(shí)可先用空樣品(只有緩沖液)進(jìn)行試打,以檢驗(yàn)儀器安全性和所用緩沖液的純度,如發(fā)現(xiàn)有電穿情況要立刻停止操作分析原因在進(jìn)行試驗(yàn)。
電爆現(xiàn)象:初始設(shè)置參數(shù)與反饋參數(shù)不*,反饋值都會(huì)很大幅度的降低。
發(fā)生電穿的可能原因:
1. 設(shè)置參數(shù)出現(xiàn)錯(cuò)誤:場(chǎng)強(qiáng)與電壓的關(guān)系,公司提供的參考數(shù)據(jù)是場(chǎng)強(qiáng)需經(jīng)換算。
E=v/c(c為電極杯的間隙)
2. 操作池內(nèi)部要始終保持干燥。
3. 如果公司提供的步驟上要求要達(dá)到某種冷凍溫度和時(shí)間一定要按要求進(jìn)行。
4. 電極杯和緩沖液不要有雜質(zhì)。(主要來(lái)自電解質(zhì)的污染)
5. 電極杯在使用之前要洗滌干凈,使用時(shí)間太長(zhǎng)則需要及時(shí)丟棄。
6. 兩次操作時(shí)間間隔大于1min,以確保儀器良好散熱。
高電壓警告:為了實(shí)際操作和安全的原因,ECM 399在施加脈沖的過(guò)程中,請(qǐng)不要接觸任何電纜或電極連接處,當(dāng)需要連接或拆下電纜時(shí),要檢查系統(tǒng)不在操作中或處于備用狀態(tài)。
試驗(yàn)操作中一些細(xì)節(jié):
電極杯清洗流程:
電擊使用之前:
1.用滅菌超純水將電極杯反復(fù)清洗兩次(盡量接觸到杯內(nèi)間隙,包括杯蓋)
2.向電極杯中加入電擊緩沖液清洗兩次
3. 棄去清洗液(甩盡液體),置于超凈臺(tái)中紫外滅菌30min,待時(shí)間結(jié)束后則可進(jìn)行試驗(yàn)操作(電極杯蓋好蓋子置于冰上等待試驗(yàn)用細(xì)胞)
電擊結(jié)束:
1.用清水將電極杯進(jìn)行沖洗
2. 用蒸餾水沖洗2-3次
3.向電極杯中加入75%酒精浸泡,置于燒杯或其他器皿中待用(若兩周后仍無(wú)試驗(yàn)需要,則需隔兩周對(duì)電極杯進(jìn)行以上清洗過(guò)程)
? 選擇合適的電轉(zhuǎn)緩沖液,盡量是低離子濃度緩沖液,減少對(duì)電擊參數(shù)的影響,以及避免爆杯。
樣品體積的建議區(qū)間50-80μl
若在電擊過(guò)程中出現(xiàn)爆杯或火花現(xiàn)象,原因有兩個(gè):
1. 緩沖液中離子成分太高或電極杯清洗不干凈導(dǎo)致短路
2. 樣品體積太少,造成電流太大形成短路
相應(yīng)解決方法:盡量排除雜質(zhì)、增加樣品體積從而滿足試驗(yàn)參數(shù)要求。