Question :

使用LCMS測(cè)定以不揮發(fā)性流動(dòng)相條件測(cè)出的雜質(zhì)時(shí)，是否還需要重新探討揮發(fā)性流動(dòng)相條件？

Solution :

不需要。如果使用Trap-free 2維LC/MS系統(tǒng)則可在線變更流動(dòng)相。

可在線實(shí)現(xiàn)不揮發(fā)性流動(dòng)相和揮發(fā)性流動(dòng)相之間的切換。
與Labsolutions聯(lián)合使用，是非常便利的支持工具。
只須將目標(biāo)雜質(zhì)導(dǎo)入MS，而無需擔(dān)心峰遺失。

Trap-Free 2維LC/MS雜質(zhì)鑒定系統(tǒng)的分析流程

使用支持工具創(chuàng)建時(shí)間程序和批處理表

只需輸入在一維UV色譜圖上的雜質(zhì)峰的保留時(shí)間，就可編制的閥切換。同時(shí)創(chuàng)建用于獲取多個(gè)雜質(zhì)與各空白數(shù)據(jù)的批處理表。

使用支持工具制作時(shí)間程序與批處理表

有力支持雜質(zhì)解析的軟件

利用作為LabSolutions附屬功能的數(shù)據(jù)瀏覽器，比較樣品與空白的數(shù)據(jù)，可方便地確認(rèn)雜質(zhì)的質(zhì)譜圖。      

數(shù)據(jù)瀏覽器上顯示樣品與空白數(shù)據(jù)的實(shí)例

注意事項(xiàng)
1.本系統(tǒng)由LC單元、質(zhì)譜儀、及啟動(dòng)套件構(gòu)成。
2.啟動(dòng)套件包括專用軟件和一套必要的配管部件。

基于Trap-Free 2維LC/MS雜質(zhì)鑒定系統(tǒng)的藥物雜質(zhì)分析

    為了提高藥物的安全性，需要解析藥物中所含雜質(zhì)有無遺傳毒性等嚴(yán)重毒性，這就要求進(jìn)行結(jié)構(gòu)解析。LC/MS可有效應(yīng)用于微量雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)解析，但HPLC分析雜質(zhì)時(shí)，經(jīng)常以210nm等短波長檢測(cè)，因此，流動(dòng)相多使用磷酸緩沖液。此時(shí)，不能以此流動(dòng)相將未知雜質(zhì)導(dǎo)入LC/MS。有時(shí)即便緩沖液的pH一致，但因一些雜質(zhì)的分離狀態(tài)發(fā)生變化，而難以使用LC/MS進(jìn)行未知雜質(zhì)的解析。

    圖1為鈣的雜質(zhì)分析，是將流動(dòng)相緩沖液從日本藥典收錄的檸檬酸緩沖液 pH5.0（為不揮發(fā)性鹽，不能導(dǎo)入LC/MS）變更為同一pH的醋酸緩沖液，將有機(jī)溶劑從四氫呋喃/ 乙腈（1/1）混合液變?yōu)橐译鏁r(shí)的色譜圖?？芍鞒煞值南疵摃r(shí)間雖然沒有大的差異，但雜質(zhì)的洗脫模式發(fā)生了較大變化。因此，為了解析雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)解析，需要以HPLC分析條件下的流動(dòng)相，將目的雜質(zhì)導(dǎo)入LC/MS。

    在此介紹應(yīng)用“Trap-free 2維LC/MS雜質(zhì)鑒定系統(tǒng)”（圖2）進(jìn)行上述雜質(zhì)結(jié)構(gòu)解析的實(shí)例。

圖1　 鈣の雜質(zhì)分析例

    在此系統(tǒng)的1維中，以通常的HPLC分析條件進(jìn)行分離，將需要進(jìn)行結(jié)構(gòu)解析的雜質(zhì)峰的峰頂附近導(dǎo)入捕集環(huán)路。此環(huán)路對(duì)于2維的分離起到進(jìn)樣器的作用。2維起到分離1維的流動(dòng)相成分和目的雜質(zhì)，以及導(dǎo)入至LC/MS的作用。

    因此， 2維的分離條件幾乎不進(jìn)行單獨(dú)探討，使用一般的基于0.1％甲酸/ 乙腈的梯度洗脫導(dǎo)入MS部分。為了進(jìn)行結(jié)構(gòu)解析，MS使用可實(shí)施MSn、獲得的精密質(zhì)量數(shù)的LCMS-IT-TOF。

圖2　Trap-free2維LC/MS雜質(zhì)鑒定系統(tǒng)配置
［1維（紅色流路）在通常的分析條件下使用］

    圖3表示按日本藥典收錄的分離條件檢測(cè)的雜質(zhì)a（含約0.2％，參照?qǐng)D1）的2維的色譜圖。沒有進(jìn)行捕集濃縮，將峰頂附近導(dǎo)入2維，去除了來自1維流動(dòng)相的影響，可將目的雜質(zhì)導(dǎo)入MS。圖4表示對(duì)此雜質(zhì)獲得的MS譜圖。

    可同時(shí)進(jìn)行正負(fù)離子測(cè)定，可測(cè)定質(zhì)量數(shù)信息。

圖3　雜質(zhì)a的2維色譜圖

圖4　雜質(zhì)a的MS譜圖

    雜質(zhì)a的m/z 718的MS/MS譜圖結(jié)果如圖5所示。將本譜圖與主成分的MS/MS譜圖進(jìn)行比較，推測(cè)雜質(zhì)a的結(jié)構(gòu)為圖6。并且，對(duì)于更微量的雜質(zhì)b（約0.01％，參照?qǐng)D1），如圖7所示，能夠以出色的S/N比獲得正、負(fù)極性的質(zhì)譜圖。

圖5　雜質(zhì)a的MS/MS譜圖

圖6　雜質(zhì)a的推測(cè)結(jié)構(gòu)

圖7 雜質(zhì)b的MS譜圖