SPHK1抑制劑(PF-543 Citrate)正在熱銷的產(chǎn)品：Annexin VI/FITC 熒光標(biāo)記膜粘連蛋白 VI抗體IgG硝鈉 GR
Anopheles stephensi protein 1/FITC 熒光標(biāo)記按蚊抗體IgG硝鍶 CP,99.0%
ANP/FITC 熒光標(biāo)記抗心鈉肽（心鈉）抗體IgG硝鍶 ACS, ≥99.0%
Anthrax/FITC 熒光標(biāo)記抗體IgG硝鍶
產(chǎn)品介紹:
PF-543Citrate是新穎的可滲透細(xì)胞的SPHK1抑制劑，Ki值為4.3nM。對(duì)SPHK1的選擇性是SPHK2的100倍以上。 注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！ 號(hào)：1415562-83-2 純度：98.22% 分子量：657.73 儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
英文名稱：PF-543 Citrate
產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg
貨號(hào)：FS-X11084
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)： 1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小； 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置； 3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化； 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)； 5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)； | 二、免疫熒光鑒定： 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min； 2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min； 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜； 5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h； 6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟：
1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；
4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
轉(zhuǎn)移生長(zhǎng)因子β受體2抗體（TGF-βRⅡ，TGFβRⅡ） TGF beta Receptor II
轉(zhuǎn)移生長(zhǎng)因子β3抗體（TGFβ3） TGF beta 3 propeptide
轉(zhuǎn)移生長(zhǎng)因子β受體1抗體 TGF beta Receptor I
jia狀腺過(guò)氧化物mei抗體 Thyroid peroxidase
腫瘤壞死因子受體1相關(guān)死亡域蛋白抗體 TRADD
生精細(xì)胞凋亡相關(guān)基因3抗體 TSARG3
三碘jia狀腺suT3抗體 T3
按蚊硫酯包含蛋白-1抗體 Thioster-containing protein 1
生精細(xì)胞凋亡相關(guān)基因6抗體 TSARG6
酪氨suan激meiC抗體(神經(jīng)生長(zhǎng)因子受體的一種) Trk C
端粒mei結(jié)合蛋白P23抗體 Telomerase Binding Protein, P23
原肌球蛋白抗體 Trop-2
SPHK1抑制劑(PF-543 Citrate)*簡(jiǎn)單類諾卡氏 (+)-Puerol B 2"-O-glucoside
大腸埃希 Clausine Z
土壤伊薩酵母 (E)-2-[3,4-雙(乙酰氧基)苯基]乙基 3-O-(2,3,4,6-四-O-乙酰基-BETA-
盤(pán)長(zhǎng)孢狀盤(pán)孢 Yuehgesin C
鐮刀 黃腐 D
燕麥?zhǔn)任鞴蟻喎N* 中國(guó)臺(tái)灣三尖杉?jí)A
總狀共頭霉（可訂購(gòu)） Wilforol C
梅林青霉 葡萄 D
紫色紅曲 喜果
細(xì)孢毛霉 Uvedalin
葉生布勒擔(dān)子酵母 鉤藤甙元 C
金針菇雜19 Tupichilignan A
日本曲霉 雷藤二萜醌 B
無(wú)乳鏈球 Triptocallic acid D
Burkholderia stabilis Vandamme et al. Triptocallic acid A
