蛋白組學分析，是蛋白質分析的一項非常重要的技術，一般會使用ESI-LCMS或者MALDI-TOFMS。許多蛋白質和肽極其微量，需要質譜儀的高靈敏度檢測才能發(fā)現(xiàn)，而這就需要一個非常穩(wěn)定的前端HPLC支持此微量檢測。
Prominence nano系列是一套納升LC系統(tǒng)，可在納升流量下進行準確流速的溶劑輸送。按照應用不同，可以配置成1D和2D系統(tǒng)。
Prominence nano具備納升流速下的高保留時間重復性，非常低的系統(tǒng)死體積和很低的交叉污染等特點。
基本性能
· 納升流速傳感器可保證準確的納升溶劑傳輸
· RFC系統(tǒng)大大降低溶劑消耗
· 低容量納升閥---保證了低的系統(tǒng)死體積
· 高靈敏度分析
納米輔助控制軟件的直觀操作
· 圖形界面直觀操作
· 可視化監(jiān)控儀器運行狀態(tài)
· 二維參數(shù)的便捷設置
蛋白質組分析的應用
· 高保留時間重復性
· 二維LC的高分辨率
納升流速傳感器可保證準確的納升溶劑傳輸
LC-20AD nano采用了新的RFC技術,可對每一個泵進行獨立的流速控制，在納升流速下保證好的流量精度。RFC系統(tǒng)是由高精度的納升流速感應器控制，確保在任何時間準確的流速測量。同時，流量傳感器配置了準確的溫度控制機制，以較大程度減少不確定的環(huán)境因素對溶劑輸送的影響。LC-20AD nano在梯度分析能保證很好的流速穩(wěn)定性，在300nL/min時候保留時間重復性的RSD小于0.2%。
RFC系統(tǒng)的原理
泵內配置了一個流速傳感器，可持續(xù)監(jiān)測泵輸出的納升流速。為了保證流速在設定的范圍內，采用反饋控制模式，傳感器的監(jiān)測到真實流速后可以自動調整分流比例，從而保證流速的準確性。另外，分流后的流動相在混合前就經過回流管路回到溶劑瓶，不會浪費溶液。
低溶劑消耗
RFC系統(tǒng)可確保每個泵輸出的溶劑分流后又回到流動相瓶中。就算在高壓梯度分析中，兩種溶劑在分離后并不會像廢棄物一樣排出，從而降低溶劑消耗并減少對環(huán)境的影響。
FCV納升閥，低死體積
FCV nano
FCV納升閥體積為25nL，在納升范圍內幾乎不會展寬。在納升LC使用捕集柱進樣和二維系統(tǒng)中，F(xiàn)CV 納升閥是*的。FCV 納升閥通過使用強化的定子和聚醚醚酮的轉子，可以大大降低樣品的吸附，同時獲得很好的耐用性。
高靈敏度分析
SIL-20AC
SIL-20AC的直接進樣功能與FCV納升閥的低擴射性能相結合可實現(xiàn)微量體積樣品的進樣分析。FCV納升閥后連接的捕集柱可以對進樣的樣品進行捕集濃縮，從而實現(xiàn)高靈敏度分析。而且，SIL-20AC被*為交叉污染較低的自動進樣器，這些特征都可以滿足高靈敏度MS分析的要求。
2維LC的輔助控制軟件
輔助控制軟件可對2維LC進行便捷設置，在軟件圖形界面上可輕松對2維HPLC的進行復雜梯度編程，設定流速等，然后生成方法文件并下載至儀器中進行控制，而圖形化的流路圖和梯度曲線代表當前狀態(tài)。簡便的設置可避免單獨使用LC控制軟件帶來的一系列的操作問題。
Prominence nano 2D系統(tǒng)在線的結合了離子交換和反向色譜模式（如下圖所示），每種色譜模式都獨立運行，兩種模式的結合可進行有效的分離。Prominence nano 2D系統(tǒng)可與配備Nano ESI源的LCMS系統(tǒng)聯(lián)用進行濕法蛋白組學分析，也可以與點靶儀和MALDI-TOF質譜聯(lián)用進行干法蛋白組學分析。
易操作的一維體系
Nano-Assist一維LC設置圖
1D 納升LC系統(tǒng)對于確認SDS PAGE分離前的蛋白質十分有效，1D系統(tǒng)只需要非常簡單的操作就可以實現(xiàn)。當然，輔助控制軟件在1D和2D系統(tǒng)中使用都是十分方便的。
高保留時間重復性
蛋白質組分析需要比較不同樣本的色譜峰差異，而樣本中又存在許多特征相似的多肽，對保留時間的重復性要求非常高。Prominence nano系統(tǒng)的高重復性可保證蛋白質組分析的高精數(shù)據(jù)，配置了RFC系統(tǒng)的LC-20AD nano可以在流速為300 nL/min獲得RSD不超過0.2% 的保留時間重復性。
牛血清白蛋白（BSA）酶解樣品的重復性
2維 LC的高分辨率
牛血清白蛋白（BSA）酶解樣品的重復性
在蛋白質組學分析時，單一的1D反相分離不足以提供足夠的色譜峰容量；所以，為了實現(xiàn)復雜樣品的分離，需要進行2D分離以保證足夠的峰容量。Prominence nano系統(tǒng)可以進行2D分析，結合陽離子交換和反相模式，為蛋白質組學分析提供所需的核心技術。下圖為200fmol酵母蛋白質的分析圖，1D分離中的未分離組分在2D中繼續(xù)分離成幾個組分，2D分離的峰容量大大大于1D所獲得的效果。
分析條件
一維
柱 | PolysulfoethylA (50mmL.×1mmI.D.) |
流動相 | 甲酸銨緩沖液 |
流速 | 40 nL/min |
捕集柱 | (5 mmL.×300 ?m I.D.) |
捕集時長 | 5分鐘 |
脫鹽溶劑 | 水/蟻酸=100/0.1 |
脫鹽流速 | L/min |
脫鹽時長 | 5分鐘 |
2維
柱 | PicoFrit (100 mmL.×75 ?m I.D.) |
流動相 | 梯度洗脫 |
流速 | 600nL/min |
溫度 | 溫度 |
檢測 | LCMS-IT-TOF |
樣本 | 酵母蛋白中的蛋白 |
* 分別利用1維和2維中不同類型的柱體進行其他組合的分離模式也是可行的。在這種情況下，分離或檢測方法由于使用的移動相分離模式或類型之間的相互作用，可能會有一些限制。
連接MALDI-TOFMS使用
Prominence nano系統(tǒng)不僅僅可以通過nano ESI接口連接LCMS使用，還可連接到配有自動點靶儀的MALDI-TOFMS儀器。為了準確分析MALDI靶的每個色譜峰，需要LC能夠在1nL到1µL范圍之內準確控制流速，Prominence nano系統(tǒng)的*了此需要。
酶解BSA樣品的UV色譜圖（500fmol）
分析條件
檢測器 | UV220 nm |
柱 | MonoCap for Fast-flow 快速MonoCap |
流動相 | 1、水/乙腈/蟻酸=98/2/0.1(v/v) B) 水/乙腈/蟻酸=5/95/0.1(v/v) |
流速 | 1 µL/min |
溫度 | 環(huán)境溫度 |
捕捉柱 | ODS (1 mmL. × 0.5 mm I.D.) |
點靶間隔 | 12 秒的點斷 |
