Nexera-e所提供的全二維液相色譜法通過(guò)將兩種獨(dú)立的分離模式相結(jié)合，進(jìn)一步拓展了液相色譜法的可能性。
在藥物雜質(zhì)、蛋白質(zhì)酶解物、食品提取物等天然物質(zhì)或合成聚合物等復(fù)雜樣品的分析，利用Nexera-e所得到的新的分析結(jié)果，加深了對(duì)分析對(duì)象的理解，獲得全新的見(jiàn)解。
通常的一維LC無(wú)法獲得的高分離得以實(shí)現(xiàn)
在1個(gè)峰內(nèi)含有若干成分吧？樣品越復(fù)雜、類似成分越多，則在1個(gè)峰中就越有可能含有多個(gè)成分。單一分離系統(tǒng)無(wú)法分離的成分，如果使用互相獨(dú)立的2個(gè)系統(tǒng)的話，則可以實(shí)現(xiàn)分離。
如上例所示的峰，在單一分離系統(tǒng)中重疊的成分，通過(guò)使用2個(gè)分離系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)了分離。另外，1維LC確認(rèn)到74個(gè)峰，而通過(guò)使用Nexera-e，在同一分析時(shí)間內(nèi)檢測(cè)出超過(guò)200個(gè)峰。
限度利用2個(gè)不同分離系統(tǒng)，實(shí)現(xiàn)全2維分離
全二維液相色譜將兩種獨(dú)立的分離系統(tǒng)加以結(jié)合，可大幅度地提高分離性能，是全新的分析方法。通過(guò)多個(gè)分離系統(tǒng)的組合，可以分離使用一維LC難以分離的成分，為此，可應(yīng)用于復(fù)雜樣品的分析。另外，與一般的二維LC不同，獲取的數(shù)據(jù)反映出第1維與第2維雙方的分離結(jié)果，可限度地應(yīng)用雙方的分離系統(tǒng)。
| 復(fù)雜樣品分離不充分，造成峰重合 | 將一維分離的成分進(jìn)一步以第2根色譜柱進(jìn)行分離， 即使復(fù)雜的樣品也可實(shí)現(xiàn)高分離 |
通常的1維LC與Comprehensive 2D-LC的差異
全二維液相色譜將一維系統(tǒng)的洗脫液在二維譜圖上進(jìn)一步細(xì)致地分割解析，在線連續(xù)地在二維系統(tǒng)實(shí)施分離。通過(guò)2個(gè)環(huán)路的閥構(gòu)成一維與二維系統(tǒng)相交的流路結(jié)構(gòu)，切換閥使這些環(huán)路交替地重復(fù)進(jìn)行一維洗脫液分割和向二維系統(tǒng)注入的動(dòng)作。
全二維液相色譜系統(tǒng)的流路與動(dòng)作
在二維譜圖上解析各成分
全二維液相色譜分析的優(yōu)點(diǎn)不僅僅是高分離。在二維譜圖上，維軸與第二維軸可分別為不同的分離條件，因此，各成分的物性與圖上的位置相關(guān)。在二維譜圖上進(jìn)行解析，可對(duì)具有類似結(jié)構(gòu)的化合物分組，可直接觀察到各成分群，或在圖上解析未知成分的性質(zhì)。
磷脂39成分的同時(shí)分析
PG：磷脂 PE：磷脂酰乙醇胺 PA：磷脂酸
PI：磷脂酰肌醇 PS：磷脂?！C：磷脂酰
磷脂各成分通過(guò)第1維正相系統(tǒng)基于極性基團(tuán)種類進(jìn)行分離，通過(guò)第2維反相系統(tǒng)基于脂肪酸鏈長(zhǎng)進(jìn)行分離。
上圖按種類分組表示各成分。
磷脂有以正離子模式較強(qiáng)檢出的成分和以負(fù)離子模式較強(qiáng)檢出的成分，但利用LCMS-8050的高速正負(fù)離子切換［UFswitching］檢測(cè)，可以在1次分析中獲得兩組數(shù)據(jù)。
由擁有性能的Nexera X2構(gòu)筑
為實(shí)現(xiàn)全二維液相色譜，要求各構(gòu)成組件具有性能。比如，二維分析系統(tǒng)滿足超快速梯度分析，即高流量且超高壓的送液要求。并且，為了解析樣品間的差異，還要求在上述分析條件下具有非常高的保留時(shí)間重現(xiàn)性。 Nexera-e采用具有水平的Nexera X2的各組件，具備充分滿足上述嚴(yán)苛要求的性能。比如，送液?jiǎn)卧狶C-30AD可至3 mL/min的高流量區(qū)域，并以130 MPa耐壓實(shí)施送液。與同樣可耐壓130 MPa的高壓流路切換閥FCV-32AH組合，擴(kuò)大了二維分析系統(tǒng)的選擇范圍。
Nexera-e 系統(tǒng)（PDA型號(hào)）
 | Nexera-e采用本公司自行開(kāi)發(fā)的低容量流路切換閥。 全二維液相色譜需要頻繁的切換流路，因此，如果閥的密封因磨損易產(chǎn)生粉末，則可能在分析中造成流路堵塞等，有可能對(duì)分析產(chǎn)生重大影響。流路切換閥FCV-32AH采用了在開(kāi)發(fā)Nexera X2的自動(dòng)進(jìn)樣器過(guò)程中培育優(yōu)異技術(shù)，排除了這種擔(dān)心。 |
 | 對(duì)于基本上以超快速分析為主的全二維液相色譜來(lái)說(shuō)，檢測(cè)器的高速采樣也非常重要。 Nexera X2的光電二極管陣列檢測(cè)器SPD-M30A達(dá)200 Hz，三重四極桿型質(zhì)譜儀LCMS-8050也通過(guò)采用UFMS技術(shù)而實(shí)現(xiàn)了超高速掃描，可從容地采集數(shù)據(jù)。 |
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標(biāo)準(zhǔn)品分析中各成分的保留時(shí)間重現(xiàn)性（n=6）
（1: Acetanilide, 2: Methyl paraben, 3: Acetophenone, 4: Propyl paraben, 5: Butyrophenone, 6: Benzophenone, 7: Hexanophenone)
二維數(shù)據(jù)變換與二維數(shù)據(jù)上的定性?定量解析
數(shù)據(jù)采集所獲得的數(shù)據(jù)通過(guò)全二維液相色譜解析軟件ChromSquare變換為二維等高線數(shù)據(jù)。色譜圖上的峰在等高線數(shù)據(jù)上被識(shí)別為點(diǎn)，以這個(gè)點(diǎn)為單位進(jìn)行定性·定量解析處理。
磷脂標(biāo)準(zhǔn)樣品的LC×LC/MS數(shù)據(jù)解析
（左上：等高線圖（放大），左下：MS譜圖，右上：第2維的色譜圖，右下：等高線圖（整體））
隨著指針的移動(dòng)，顯示表示MS譜圖。比如，可以對(duì)有特征的點(diǎn)簡(jiǎn)便地使用MS譜圖進(jìn)行定性分析。
與通常的HPLC分析相同，可根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)樣品的分析結(jié)果制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行未知樣品的定量分析。
 點(diǎn)整體的MS譜圖（紅線）和數(shù)據(jù)點(diǎn)的MS譜圖（藍(lán)線） |  標(biāo)準(zhǔn)曲線 |
