隨著我國養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展，越來越多的抗生素被應(yīng)用于漁業(yè)中，這些藥物的使用幾乎貫穿養(yǎng)殖的全過程，由于養(yǎng)殖戶不遵守休藥期規(guī)定及未正確使用藥物，造成在水產(chǎn)品中的高水平殘留。人長期攝入含抗生素殘留的水產(chǎn)品后，藥物不斷在體內(nèi)蓄積，當(dāng)濃度達(dá)到一定量后，就會對人體產(chǎn)生毒性作用，四環(huán)素類藥物的毒性反應(yīng)主要表現(xiàn)為對胃、腸、肝臟的損害及牙齒的染色等。還會造成過敏反應(yīng)，二重感染，致畸胎作用。而*、*鈉有嚴(yán)重的副作用，它能抑制人體骨髓造血功能而引起再生障礙性貧血和粒狀白細(xì)胞缺乏癥等疾病，對人類的健康構(gòu)成潛在的危害。因此，水產(chǎn)品中抗生素殘留量的檢測技術(shù)，日益受到國內(nèi)外學(xué)者的關(guān)注。本整體分析方案用固相萃取(SPE)-有效液相色譜儀分析法進(jìn)行6種抗生素的同時(shí)固相萃取和測定的**條件，結(jié)果令人滿意。
一、實(shí)驗(yàn)部分
1、儀器與試劑
有效液相色譜儀LC-3000，二極管陣列檢測器，G1313A ALS自動進(jìn)樣器； C18 5μm 250mm×4.6mm液相色譜柱。固相萃取小柱為ZORBAX SPE C18Cart。12頭固相萃取真空富集裝置。*KS—500D，超速離心機(jī)LD4 —2，攪肉機(jī)，渦旋混合器。甲醇(色譜純)，*(分析純)，EDTA(分析純)，高氯酸溶液(優(yōu)級純)、硝酸(優(yōu)級純)。*、四環(huán)素、*、*、*、*鈉標(biāo)準(zhǔn)品。
2、有效液相色譜分析條件
色譜柱為 C18 5μm 250mm×4.6mm，流動相為0.O1mol/L*+0.001 mol/L EDTA:甲醇=60:40(V/V，pH=2.0)，流速為0.8ml/min，檢測波長為268nm柱溫為25℃，進(jìn)樣量為20μl。
3、實(shí)驗(yàn)方法
(1)*、四環(huán)素、*、*、*、*鈉標(biāo)準(zhǔn)儲備液的配制
分別稱取O.0100mg*、四環(huán)素、*、*、*、*鈉標(biāo)準(zhǔn)品置于6個(gè)1Oml容量瓶中，分別加入甲醇溶解并定容至刻度，此溶液濃度分別為1.00mg/ml，置于冰箱冷藏室保存。
(2)混合標(biāo)準(zhǔn)中間液的配制
分別吸取*、四環(huán)素標(biāo)準(zhǔn)儲備液各1.00ml，*、*、*、*鈉標(biāo)準(zhǔn)儲備液各 2.00m1.置于100ml容量瓶中，用流動相A液定容至刻度，此溶液濃度分別為：*(10μg/m1)、四環(huán)素(10μg/m1)、*(20μg/m1)、*(20μg/m1)、*(20μg/m1)、*鈉(20μg/m1)，置于冰箱冷藏室保存。
(3)標(biāo)準(zhǔn)使用液的配制
準(zhǔn)確吸取混合標(biāo)準(zhǔn)中間液0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、 8.0、10.0ml分別置于1Oml容量瓶中，用流動相A液定容至刻度，擁有的標(biāo)準(zhǔn)系列為：0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、 8.0、10.0μg/m1(*、四環(huán)素);0.2、0.4、1.0、2.0、4.0、8.0、12.0、16.0、20.0μg/m1(*、*、*、*鈉)。
(4)流動相A液的配制
0.01mol/L*+0.001mol/L EDTA，用30%硝酸調(diào)至pH=2.0，經(jīng)0.45μm雙層水系濾膜過濾。
(5)流動相B液的配制
0.01mol/L*，用30%硝酸調(diào)至pH=2.0，經(jīng)0.45μm雙層水系濾膜過濾。
(6)樣品前處理
準(zhǔn)確稱取5.00g攪碎的水產(chǎn)品于5Oml帶蓋的塑料離心管中，加入20%高氯酸溶液 15ml，渦旋1min，將此離心管放入*中提取20min后，用離心機(jī)離心10min，收集上清液于25ml容量瓶中，往殘?jiān)屑尤?Oml 2%高氯酸溶液，用玻棒攪動使樣品均勻分散于高氯酸溶液中，將此離心管放入*中提取20min后，用離心機(jī)離心10min，收集上清液于上述 25ml容量瓶中，合并兩次上清液，用2%高氯酸溶液定容，取該提取液1O ml經(jīng)已調(diào)節(jié)的固相萃取小柱吸附，用10%甲醇水2ml沖洗固相萃取小柱，用50%甲醇水1ml洗脫后收集備用。
(7)樣品測定
吸取樣品溶液20μl進(jìn)樣，進(jìn)行HPLC分析，記錄六種抗生素的峰面積。根據(jù)6種抗生素的保留時(shí)間和紫外吸收光譜圖定性，峰面積定量。
