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上海鼎桑生物科技有限公司一家專注于生命科學的科技企業(yè)，由在國內(nèi)科研試劑領域有著豐富從業(yè)經(jīng)驗的技術團隊和管理團隊組建而成，專營進口生物試劑，科學儀器，實驗消耗品等。
公司將不斷把上優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品引入國內(nèi)市場，滿足客戶的需求，公司也將緊跟生命科學的發(fā)展，為廣大科研工作者探索生命科學的奧秘奉獻綿薄之力.
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美國POLYSCIENCES公司成立于1961年，主要生產(chǎn)和經(jīng)營LIFE SCIENCES生命科學（膠體金,不含甲醛的甲醇等），病理學和顯鏡學 微球和粒子和磁珠各種單體和聚體等產(chǎn)品。polysciences公司是世界上zui大zui全的23966上海鼎桑代理 多聚化合物供應商,同時是世界*的免疫學,組織化學試劑耗材供應商.
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轉染試劑線性PEI溶液的配制（1mg/ml）
聚乙烯亞胺（Polyethylenimine，PEI）是聚乙烯亞胺是一種具有較高的陽離子電荷密度的有機大分子，每相隔二個碳個原子，即每“第三個原子都是質(zhì)子化的氨基氮原子，使得聚合物網(wǎng)絡在任何pH下都能充當有效的“質(zhì)子海綿”(proton sponge)體。PEI，可用作轉染試劑，它可以縮聚DNA分子形成顆粒并轉染真核細胞。有實驗證明，分子量為25000的線性PEI即Polysciences 23966轉染效率zui高。
下面將主要介紹polysciences 線性PEI(#23966)的產(chǎn)品特性及其溶液的配制過程。
1. 產(chǎn)品特性:
產(chǎn)品名稱：線性聚乙烯亞胺(PEI)
CAS號 | 9002-98-6，26913-06-4 | 分子式 | (CH2CH2NH)n | 分子量 | 25000 |
熔點 | 73-75°C | 外觀 | 白色或黃色固體 | 結構式 |
|
溶解性 | 溶于熱水，低pH值的冷水，甲醇和乙醇；不溶于：苯，aether和丙酮 | 儲存 | 室溫 |
2. 溶液配制
此指導說明書是經(jīng)polysciences公司研究，測試及其客戶反饋的后編寫的。下面推薦一種簡單適用而的方法，講述如何配制濃度為1mg/mL的轉染試劑的配制。
材料：
1g #23966、1L 純水（Milli-Q®純水，注射用水（WFI），或類似的生物級水）、12 M鹽酸、10 M氫氧化鈉、一次性0.1-0.2µm PES真空無菌過濾器、無菌高聚乙烯或聚丙烯試劑瓶。
器材：
1 L 玻璃燒杯、1 L玻璃量筒、核準pH計、2支1 mL塑料移液管、托盤、聚四氟乙烯（PTFE）攪拌棒、真空泵
配制過程：
1g #23966——900mL水溶解——攪拌、加熱（60-80°C）——加HCl調(diào)pH到2.0左右——蓋上燒杯，攪拌3h（直至粉末*溶解）——冷卻至室溫——加NaOH調(diào)pH到6.9-7.1——移液到量筒，加水補足至1L——真空過濾消毒——分裝，-20°C保存。
備注：加熱或加酸都有助于PEI溶解。當然酸可能不用加那么多，詳細用量可試加一點攪拌看看，足夠溶解就行，不一定需要加到pH那么低。
試劑儲存：
冷凍部分溶液可在-20°C保存長達一年；部分解凍的溶液可在4°C保存2周，不可反復凍融。
粉末儲存：
未開封的粉末有效期兩年?？稍谑覝叵卤４嬷敝潦褂?。
轉染操作流程：(瞬時轉染方法) 轉染效率（部分數(shù)據(jù)參考，本數(shù)據(jù)來源于網(wǎng)絡，不作為售后投訴依據(jù)）
1. 接種細胞： 轉染前一天，用膠原酶（WORTHINGTONG 公司 LS004196)消化細
胞并計數(shù)（不建議用胰酶）。調(diào)整細胞濃度，將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿，每個孔置
入的細胞量應能使轉染時細胞匯合度達到 70~80%。
2. 準備 DNA-PEI 復合物： DNA、PEI 試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其
升至室溫。，用 Opti-MEM ITM（Invitrogen）或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適
量 DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋 PEI 試劑。每 1 μg DNA 需用 1-5 μL 線性 PEI 轉
染試劑。一邊輕輕渦旋裝有 DNA 溶液 的試管，一邊將稀釋的線性 PEI 轉染試劑滴
加至試管中（注意：請勿顛倒添加順序）。充分混勻后，室溫靜置 10~25 min 以
形成 DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時，請用圓底聚丙烯管，例如 NEST 5 mL /14
mL 離心管。
3. 轉染細胞： 直接向每個孔中加入 DNA-PEI 復合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在
無血清條件下轉染時，去除生長培養(yǎng)基，替換成無血清培養(yǎng)基，然后滴 DNA-PEI 復
合物。轉染 3 h 后，添加½體積的包含 30%血清的生長培養(yǎng)基。
4. 孵育細胞和分析結果： 在 CO2 培養(yǎng)箱中 37℃下孵育細胞至可以分析檢測。轉
染后快 的話7 h 即可檢測到轉入基因的表達。 請自行確定適合檢測時間。
細胞種類 中文名稱 PEI 轉染效率
HEK293 人胚腎細胞 90%-95%
293-T 人胚腎細胞 90%-95%
CHO-K1 倉鼠卵巢細胞 80%-90%
U251 人源神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞 80%-90%
Hela 人源宮頸ai細胞 70%-80%
COS7 猴 SV40 轉化腎細胞 70%-80%
HepG2 人源肝癌細胞 70%-80%
NIH/3T3 小鼠胚胎成纖維細胞 60%-70%
膠質(zhì)瘤干細胞 人源膠質(zhì)瘤干細胞 60%-70%
Patu8988 人源胰腺癌細胞 60%-70%
U2OS 人源骨肉瘤細胞 60%-70%
轉染試劑和 DNA 配比數(shù)據(jù)
細胞型號 培養(yǎng)基 每孔細胞數(shù) DNA 的量 轉染試劑量 和培養(yǎng)基混合 4-6h
293H DMEM 3×10
4
0.2µg 0.5µL DMEM+10%FBS
293FT DMEM 3×10
4
0.2µg 0.5µL DMEM+10%FBS
293E DMEM 3×10
4
0.2µg 0.5µL DMEM+10%FBS
293F DMEM 3×10
4
0.2µg 0.5µL DMEM+10%FBS
COS7 DMEM 1.5×10
4
0.4µg 0.5µL DMEM+10%FBS
hela DMEM 2×10
4
0.3µg 0.5µL 1640+15%FBS
Caco2 MEM 3.5×10
4
0.3µg 0.75µL MEM+10%FBS
BHK21 MEM 2×10
4
0.2µg 0.5µL MEM+10%FBS
CHO-DG44 DMEM+HT+pro 2×10
4
0.5µg 0.5µL DMEM+HT+pro +10%FBS
RAW264.7 DMEM 3×10
4
0.2µg 0.5µL DMEM +10%FBS
MCF7
MEM/NEAA+0.01mg/mL insulin + sodium
pyruvat
2×10
4
0.1µg 0.25µL
MEM/NEAA+0.01mg/mL insulin + sodium
pyruvat+10%FBS
SW480 IMDM 3×10
4
0.4µg 0.5µL IMDM +10%FBS
MDCK DMEM 4×10
4
0.6µg 1µL DMEM+10%FBS
CHO-K1 IMDM+Pro 3×10
4
0.2µg 0.5µL IMDM+Pro +10%FBS
HepG2 DMEM 3×10
4
0.5µg 0.75µL DMEM+10%FBS
A549 DMEM 2×10
4
0.3µg 0.5µL DMEM+10%FBS
NIH/3T3 DMEM 1.5×10
4
0.1µg 0.75µL DMEM+10%FBS
vero DMEM 3×10
4
0.3µg 0.75µL DMEM+10%FBS
sf9 SIM SF 5×10
4
0.4µg 0.75µL SIM SF+10%FBS
