大腸桿菌檢測的新方法！
大腸桿菌檢測的新方法！
大腸桿菌是人和許多動物腸道中主要且數(shù)量多的一種細(xì)菌，主要寄生在大腸內(nèi)。
那怎么檢測大腸桿菌呢？又該怎么消滅它呢？
下面概述了7種大腸桿菌檢測的新方法。
一、氣相色譜（GC）和高效液相色譜法（HPLC）
氣相色譜法主要是將大腸桿菌經(jīng)過一系列衍生化的前處理后，為接下來的分析研究提供盡可能多的化學(xué)組分。大腸桿菌的污染程度可以用頂空氣相色譜法來分析，其原理是利用食品密封系統(tǒng)頂部的微生物代謝產(chǎn)物CO2對微生物進行分析。這種方法對食品質(zhì)量安全檢測有重大意義。與上述傳統(tǒng)技術(shù)相比，此種方法具有檢測速度快、靈敏度高的優(yōu)點。
高效液相色譜法（HPLC）主要是根據(jù)離子配對反相層析的原理來分析核酸。HPLC主要是針對DN段分離。長鏈DNA所攜帶的磷酸基團比較多，因此會有更多的TEAA與之相融合，其在柱內(nèi)停留的時間增加。因為乙腈具有親水性，可以通過其而將DNA分離，在具備一定的變性溫度下，可以通過圖譜顯示明顯的吸收峰。該技術(shù)具有準(zhǔn)確度高、靈敏度高、成本低等優(yōu)點，可大大提高工作效率。
二、ATP生物發(fā)光技術(shù)
ATP生物發(fā)光技術(shù)是近些年來發(fā)展較快的微生物快速檢測方法。ATP是活細(xì)胞中的能量代謝產(chǎn)物，為細(xì)胞提供各種生理活動所需的能量，而且其在生物體內(nèi)含量維持在一定的范圍內(nèi)。ATP含量檢測的一種方法是熒光光度法，生物發(fā)光是活細(xì)胞在熒光素酶催化下發(fā)出的熒光。目前使用的熒光素酶主要來源于北美的螢火蟲，相對分子質(zhì)量為62000的蛋白質(zhì)，它可以催化熒光素的氧化反應(yīng)，這種反應(yīng)的終產(chǎn)物不穩(wěn)定，很快分解產(chǎn)生熒光。與傳統(tǒng)檢測方法相比，不同之處在于幾分鐘內(nèi)便可獲得檢測結(jié)果，而且熒光光度計是便攜式的，使用非常方便，適用于現(xiàn)場檢測，這種技術(shù)可以用于檢測微小的污染物水平以及食品加工設(shè)備及其表面的清潔程度的檢測。
三、PCR檢測技術(shù)
聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)即PCR（polymerase chain reaction），該技術(shù)是在1971年首先被Kleppe等提出，1985年才作為一種檢測方法獲得認(rèn)可。PCR檢測技術(shù)是一種聚合酶鏈反應(yīng)，其采用變性―退火―延伸三個步驟使DNA基因能夠在體外實現(xiàn)解旋解鏈，類似于一種體外增加、復(fù)制形式。理論上可在2h內(nèi)將一個DNA分子擴增到106～109倍，采用瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR擴增產(chǎn)物的熒光條帶。
目前PCR技術(shù)廣泛用于生命科學(xué)的許多學(xué)科中。在食品微生物檢測領(lǐng)域，PCR可用于快速檢測食品中的微生物含量。常用的主要有免疫PCR、實時熒光定量PCR、多重PCR、反轉(zhuǎn)錄PCR和實時定量PCR等。史云等建立了用于肉及肉制品中大腸桿菌的兩重PCR檢測方法，但該方法需要較長的時間的樣品純化處理，且對操作人員的專業(yè)知識的要求也較高。
四、生物傳感器檢測技術(shù)
生物傳感器主要是以生物化學(xué)傳感技術(shù)為基礎(chǔ)，用抗體、酶、細(xì)胞等作為識別元件，并與信號轉(zhuǎn)換器和電子測量儀聯(lián)合構(gòu)成的一種分析工具。目前已經(jīng)成熟的商品化的傳感器有免疫傳感器、酶傳感器、DNA雜交傳感器、微生物傳感器、分子印跡傳感器等。生物傳感器具有諸多優(yōu)點，如高靈敏度、高選擇性、較好的穩(wěn)定性、低成本、且能在復(fù)雜的體系中快速在線監(jiān)測。
現(xiàn)在用于信號傳導(dǎo)的方法有表面聲波傳導(dǎo)、電氣化學(xué)方法和光學(xué)傳導(dǎo)法。用于食品微生物檢測的主要是免疫傳感器和基因傳感器，原理是利用DNA雜交和抗原抗體反應(yīng)進行檢測，再將其轉(zhuǎn)換為光信號或電信號并通過儀器放大輸出。生物傳感器的分子識別元件的載體可采用多種材料，利用較多的是光纖、熒光光度計等。
殷涌光等人利用抗體免疫吸附反應(yīng)，采用一次抗體――抗原一二次抗體的夾心法將膠體金復(fù)合抗體作為二次抗體大幅度增加質(zhì)量，并延長膠體金復(fù)合抗體與微生物的結(jié)合過程，放大和穩(wěn)定信號，從而顯著提高檢測精度。
五、免疫磁珠技術(shù)（IMS）
免疫磁珠技術(shù)是一種大腸桿菌的分離技術(shù)。其原理是以磁珠為抗體載體，磁珠和大腸桿菌結(jié)合，通過磁力來實現(xiàn)力學(xué)移動進而將大腸桿菌進行分離。與其他的細(xì)菌分離方法相比，免疫磁珠技術(shù)在很大程度上提高了樣本中病原性副溶血性弧菌的檢測效率。
免疫磁珠技術(shù)可以快速地在不同菌種的樣本中處理不同的微生物，該方法可以大幅度地提升檢測效率。
六、自動化儀器
自動免疫測定分析儀誕生于20世紀(jì)70年代。隨著科技的發(fā)展，自動免疫測定分析儀在各領(lǐng)域的應(yīng)用也越來越多，該儀器使用簡單，無太多操作干擾，既省時省力，又大大提高了檢測的精確度和靈敏度。
這種自動酶標(biāo)免疫測試系統(tǒng)目前在國內(nèi)外是酶免疫自動化系統(tǒng)中應(yīng)用廣泛的一種。但是由于與其配套的試劑昂貴，從而限制了其在基層實驗室的使用。
七、基因芯片技術(shù)
基因芯片技術(shù)（gene chip）是20世紀(jì)90年代興起的生物技術(shù)，也叫DNA微陣列（DNA mi―croarray）。采用原位合成（in situ synthesis）或顯微打印方法，將數(shù)以萬計的DNA探針固化在支持物表面，產(chǎn)生二維DNA探針陣列，接著與標(biāo)記的樣品進行雜交，通過檢測雜交信號來實現(xiàn)對生物樣品快速、并行、高效地檢測，由于它常用硅芯片作為固相支持物，而且制備中運用了計算機芯片的制備技術(shù)，所以稱為基因芯片技術(shù)。
基因芯片可以對食品中的致病菌實行高通量和平行檢測，一次實驗就可以得出全部檢測結(jié)果。另外整個檢測在很短時間內(nèi)即可得出檢測結(jié)果，且敏感性高，特異性強。但是也有一些問題：目前的基因芯片一般都采用熒光標(biāo)記，因此需要昂貴的芯片制作系統(tǒng)以及激光共聚焦掃描儀，另外操作過程對工作人員要求有很高的專業(yè)素質(zhì)等等。所以基因芯片的制備技術(shù)限制其應(yīng)用而且還需改進。
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