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細(xì)胞培養(yǎng)用品消毒滅菌的方法與注意事項(xiàng)!

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                細(xì)胞培養(yǎng)用品消毒滅菌的方法與注意事項(xiàng)!



細(xì)胞培養(yǎng)用品消毒滅菌的方法與注意事項(xiàng)!


每次做完實(shí)驗(yàn),細(xì)胞培養(yǎng)用品也都清洗了,為什么細(xì)胞的又污染了?原因在這:細(xì)胞培養(yǎng)用品清洗完還需要消毒滅菌哦!操作方法如下:


一、濕熱消毒


⒈濕熱消毒的要求


使用壓力蒸汽滅菌器進(jìn)行濕熱消毒。


①消毒物品不能裝得太滿,物品之間應(yīng)留有空隙,以利于消毒器內(nèi)蒸汽的流動(dòng)。


②排氣管要插入消毒器的槽內(nèi)。若排氣管斷裂,要將排氣管與排氣閥調(diào)至同一位置。


③玻璃器材使用端(管口、瓶口)要向下放置。


④液體消毒時(shí),用棉塞或插有針頭的膠塞封瓶口。


⑤加熱前將放氣閥摘子置垂直位(開放),消毒器內(nèi)空氣隨溫度升高由此閥孔逸出,容器內(nèi)冷空氣隨之排出。當(dāng)水煮沸時(shí),有一股較急的蒸汽沖出時(shí),將放氣閥摘子置水平位(關(guān)閉)。排除冷空氣的另一種方法是:放氣閥摘子置水平位(關(guān)閉),加熱,壓力升至5磅時(shí),將摘子置垂直位(開放),冷、熱空氣先后排出(可用手試)。待壓力指針回歸零位時(shí),放氣閥摘子再置水平位(關(guān)閉)。


⑥繼續(xù)加熱,當(dāng)消毒器內(nèi)升壓至需要壓力時(shí),計(jì)時(shí)并使壓力恒定。壓力維持方法:用電加熱時(shí),可通過電源和滅菌器間的穩(wěn)壓器調(diào)節(jié);沒有穩(wěn)壓器時(shí),用放氣閥摘子自動(dòng)排氣調(diào)節(jié);用煤氣加熱時(shí),可調(diào)節(jié)火力維持壓力。根據(jù)消毒物品種類不同所選擇的消毒壓力和時(shí)間也不同,一般物品(如布類、金屬器械、玻璃器皿等)消毒的要求是15磅20分鐘;橡膠制品為10磅10分鐘;常規(guī)液體消毒15磅15分鐘。一般認(rèn)為在這種壓力下1分鐘內(nèi)幾乎可殺死所有微生物,但由于消毒物品的包裝內(nèi)仍可能留有冷空氣,而使高壓蒸汽不能達(dá)到消毒器的各部分,所以要延長(zhǎng)消毒時(shí)間。


⑦消毒完畢,待壓力指針降至零位,再等數(shù)分鐘,待放氣閥摘子放完氣后打開消毒器蓋。液體瓶口棉塞換膠皮塞或拔去膠皮塞針頭換新塞。


⒉濕熱消毒的注意事項(xiàng)


①不可用安全閥摘子排氣。


②消毒的過程中若出現(xiàn)漏氣現(xiàn)象,可調(diào)節(jié)消毒器蓋內(nèi)的膠墊的位置。


③滅菌完畢,不要急于取出消dupin,可利用消毒器的余熱去除物品部分濕氣,待半小時(shí)左右再移入干燥箱烘干。


二、干熱消毒


這種消毒方法主要用于玻璃器皿消毒,一般溫度在160℃維持90—120分鐘就可以殺死芽胞,達(dá)到消滅包括細(xì)菌、芽孢在內(nèi)的一切微生物的目的,還可破壞熱原質(zhì)。消毒完畢,待烘箱內(nèi)溫度冷卻后再開門,避免因冷空氣突然進(jìn)入,烘箱內(nèi)溫度驟降引起玻璃器皿損壞。


三、紫外線消毒


紫外線直接照射消毒是各實(shí)驗(yàn)室常用的方法,主要用于培養(yǎng)室空氣、操作臺(tái)、塑料培養(yǎng)皿和培養(yǎng)板等表面消毒。進(jìn)行室內(nèi)消毒時(shí),紫外線燈應(yīng)距地面2.5米,使各處有0.06微瓦能量的照射。當(dāng)室內(nèi)有塵土?xí)r,殺菌能力減弱,故其消毒環(huán)境應(yīng)清潔無塵,并要求消毒空氣濕度小于50%,才能達(dá)到殺菌效果。紫外線消毒時(shí)產(chǎn)生臭氧,對(duì)身體有害,故紫外線消毒停止后30分鐘才可入室工作。目前有的實(shí)驗(yàn)室采用電子滅菌燈代替紫外燈進(jìn)行空氣消毒。


四、濾過消毒


大多數(shù)培養(yǎng)用液,如人工合成培養(yǎng)基、血清、酶液等均采用濾過法除菌。常用的除菌濾器有正壓式和負(fù)壓式兩種。


⒈正壓式(加壓式)濾過消毒


正壓式除菌濾器為金屬結(jié)構(gòu),中間墊一種特制的混合纖維素酯微孔濾膜,其過濾速度較快,效果較好,被多數(shù)實(shí)驗(yàn)室采用。濾膜孔徑有0.6微米、0.45微米、0.22微米三種規(guī)格。濾過除菌時(shí),常使用0.22微米孔徑的濾膜。濾器上下層各有一槽,放置硅膠墊圈,將濾膜壓緊固定。


濾膜使用時(shí)應(yīng)注意:


①濾膜薄且光滑,容易移動(dòng),安裝時(shí)膜位置一定要放正。過分干燥的濾膜很脆,在高壓或高溫干燥時(shí)易破裂,因此安裝前可先用三蒸水潤(rùn)濕濾膜。


②為保證過濾效果,在使用時(shí),每次墊兩張濾膜,上面一張孔徑為0.45微米,下面一張孔徑為0.22微米,或兩張均為0.22微米。


③使用無齒玻片鑷子夾取濾膜,以防止鑷齒弄破濾膜。


④加大壓力時(shí)用力應(yīng)均勻,用后打開濾器對(duì)光檢查濾膜是否移動(dòng)和有無破裂。


⑤濾器濕熱消毒,37℃干燥。濾膜用后丟棄。若過濾少量液體,可將小型針頭濾器安裝在注射器上使用。目前許多廠家有一次性針頭濾器出售。國(guó)產(chǎn)針頭濾器易污染。


⑥不同廠家的濾膜質(zhì)量有差異。


⒉負(fù)壓式濾過消毒


負(fù)壓式濾過消毒常使用玻璃濾器。玻璃濾器以燒結(jié)玻璃濾板固定在一玻璃漏斗上做成,適于各種培養(yǎng)液的濾過除菌,但不宜濾過血清等粘稠液體,因?yàn)槿菀锥氯麨V板孔。根據(jù)濾板孔徑大小分為G0—G6幾種規(guī)格,一般使用G6型(孔徑為0.22微米)除菌。玻璃濾器漏斗接抽濾瓶,膠管連接抽濾瓶和抽氣瓶,抽氣瓶再與真空抽氣泵相連,或 抽濾瓶用膠管與玻璃水泵相連。負(fù)壓式濾過消毒的缺點(diǎn)是濾速較慢,清洗過程繁瑣。


負(fù)壓式除菌濾器安裝使用注意事項(xiàng):


①漏斗與抽濾瓶連接部位要旋緊,并用消毒布包緊連接部位,以保證瓶口不漏氣。


②當(dāng)抽濾瓶?jī)?nèi)有負(fù)壓形成時(shí),先夾緊抽濾瓶下口與抽氣瓶連接的膠管,再緩慢停止抽氣,防止有菌空氣倒回,污染濾液。自然濾過一段時(shí)間,待流速減慢可再行抽氣。


③當(dāng)漏斗中剩余液體為50~100毫升時(shí),夾緊下口膠管停止抽氣,空氣隨液體自然濾過消毒進(jìn)入瓶?jī)?nèi),瓶?jī)?nèi)壓力升高,真空解除。


④拆除真空泵和抽氣瓶連接裝置,拆除漏斗與抽濾瓶連接部包布。


⑤漏斗與抽濾瓶連接部位在火焰前方均勻燒灼后,兩者分開,抽濾瓶斜放在超凈臺(tái)上,瓶口順風(fēng)向。


五、消毒劑


75%酒精、新潔爾滅、過氧乙酸、乳酸和洗必泰等都是常用的有效消毒劑。0.5%的過氧乙酸在10分鐘內(nèi)可將芽孢菌和各種病毒殺死;乳酸蒸汽常用做無菌室內(nèi)或周圍環(huán)境的定期消毒;75%酒精常用于超凈臺(tái)的臺(tái)面、器械、實(shí)驗(yàn)操作者的皮膚等的消毒,0.1%新潔爾滅用于對(duì)桌、椅、地面、皮膚、操作臺(tái)面進(jìn)行擦拭或浸泡消毒;0.1%洗必泰水溶液用于皮膚浸泡消毒。


六、塑料器皿消毒


塑料器皿不耐高溫,清洗干凈后用75%酒精(分析純)浸泡過夜,滅菌三蒸水浸泡兩次,每次10分鐘,紫外線照射1小時(shí),再經(jīng)細(xì)胞基礎(chǔ)營(yíng)養(yǎng)液浸泡過渡后,供短期內(nèi)使用。


七、電離輻射消毒


大包裝塑料器皿或不能用上述方法消毒的試劑,可用電離輻射消毒。電離輻射消毒方式有兩種:一種是用2.5百萬拉德60Co產(chǎn)生的γ射線照射48~72小時(shí);另一種是用大于5百萬電子伏特的高能電子束照射。前者穿透能力強(qiáng),處理效果可靠,后者適于較小物品的滅菌。消毒時(shí)由輻照中心專業(yè)人員操作。


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