糖化血紅蛋白HbA1 c的構(gòu)成
● 糖化血紅蛋白(Hemoglobin， Hb) 是指血糖和紅細胞中的血紅蛋白之間形成的非酶促的蛋白糖化反應物。
●總血紅蛋白可以分為A，A2，F(xiàn)三種組分，其中F主要在胎兒期，而成人主要為A，是由兩個a鏈和兩個β鏈構(gòu)成。A2由兩個a鏈和兩個δ鏈形成，F(xiàn)由兩個a鏈和兩個y鏈形成。
●成人HbA占97%， 又可分為HbA0和HbA1兩種，HbA0為沒有被糖基化部分，而HbA1為被糖基化部分。
●正常人維持一定的血糖水平，即會形成正常范圍內(nèi)的HbA1,其中HbA1c為主要組分，HbA1a和HbA1b的 含量則非常低。所以在反映血糖水平時主要用HbA1c來表示。
●正常人平均HbA1c水 平約為5%?？侶bA1約占6%左右，而HbA1a和HbA1b總和尚低于1%。
糖化血紅蛋白HPLC檢測方法-金標準
● 目前HPLC法測定HbA1c使其準確性和重復性得到很大的提高。
●美國臨床化學協(xié)(AACC)糖化血紅蛋白標準化分會和IFCCHbA1C標準化工作組建議，以DCCT研究中所"的方法”-HPLC方法作為檢測糖化血紅蛋白的金標準，希望以此使大多數(shù)的實驗方法能夠參照“的方法”實現(xiàn)標準化。
●1993年美國1型糖尿病控制及并發(fā)癥實驗( DCCT)和英國大規(guī)模的2型糖尿病控制與并發(fā)癥關(guān)系研究(UKPDS)的研究中把HbA1c作為糖尿病控制的一-個觀察指標。
●1996年4月起在日本，HbA1c被納入老年人保健法中糖尿病篩選的檢查項目。
●2002年美國糖尿病協(xié)會(ADA)已將其作為監(jiān)測糖尿病控制的金標準對其應用也作了明確的規(guī)定:即所有糖尿病患者均應常規(guī)測定HbA1c。其初診時測定結(jié)果為基線時的代謝狀況，此后的測定值則作為糖尿病*治療控制中的一部分， 這樣在提高糖尿病診斷水平、血糖控制、慢性并發(fā)癥的防治中具有十分重要的應用價值
填料描述
Target-Gly填料基質(zhì)為聚苯乙烯-二乙烯苯(PS/DVB)球形顆粒。運用特殊的化學鍵合技術(shù)， 將離子交換功能基團 均勻細密地鍵合在聚合物親水層的表面。
填料穩(wěn)定性
由于 PS/DVB 的表面修飾是*基于化學鍵鍵合，所以Target-Gly離子交換填料具有優(yōu)異的穩(wěn)定性。 該固定相能夠 與大多數(shù)緩沖液如醋酸銨、磷酸鹽、Tris 等相容。在 pH 6.0時以 20mM磷酸鹽緩沖溶液為流動相運行Target-Gly色譜柱，柱效幾乎沒有變化。
流動相兼容性
與水溶液，水與乙腈、丙酮或甲醇的混合物等相容。典型的緩沖液包括磷酸鹽、Tris和醋酸鹽等。
流速
內(nèi)徑為3.0-4.6mm的色譜柱典型操作流速為0.40-1.0mL/min。
安全注意事項
離子交換柱通常在高壓下運行。如果管路連接不緊，將會導致有機溶劑和注入樣品的泄漏，從而對操作人員的健康產(chǎn)生影響。一旦發(fā)生泄漏，應佩戴適當?shù)氖痔走M行處理。另外當打開色譜柱時還應采取適當?shù)谋Ｗo措施，以防止微小的高分子顆粒進入呼吸道。
色譜柱安裝與操作
色譜柱在運輸過程中或在沒有使用時，它的兩端總是用堵頭進行密封。當將色譜柱接入色譜儀器系統(tǒng)時，首先移去兩端的堵頭。請注意將流動相流動的方向與柱上標記的方向保持一致。除非出于特殊考慮，例如為了清除堵在色譜柱入口端的臟污等而需要將色譜柱反接以進行沖洗時，建議用戶在接上色譜柱時一定要遵循柱上標記的方向。由于色譜柱的連接是整個色譜操作過程的一部分，如果密封卡套過緊或安裝不合適，或者密封卡套與色譜柱端口不匹配，都有可能導致溶液的泄漏。請按照下面步驟將色譜柱與密封卡套相連接，從而將色譜柱接入 HPLC 系統(tǒng)：
（1）di一次使用的管線，請依次將管線接頭和密封卡套裝在外徑 1/16”的管線上。密封卡套的寬口端應朝向管線接頭。
（2）將管線緊緊插入色譜柱的接口，向前滑動密封卡套和管線接頭，并使管線接頭的螺紋與色譜柱端口的螺紋相互銜接，然后擰緊管線接頭。如果管線為高分子材料，請轉(zhuǎn)到步驟（4）；如果是金屬管線，請繼續(xù)（3）。
（3）在用力將管線壓入柱端接口之后，用 1/4”扳手將已擰緊的螺帽再進一步緊固。
（4）對色譜柱的另一端采用上述方法進行操作。
樣品與流動相
為了避免色譜柱的堵塞，所有樣品和溶劑，包括緩沖溶液在內(nèi)，都必須在使用前用 0.45m 或 0.2m 的濾膜 過濾。 建議使用預柱濾片（0.5m孔徑）或保護柱來保護色譜柱。Target-Gly 色譜柱可以使用水溶液， 或者有機 溶劑 （如甲醇、乙腈）與水的混合物等來作為流動相。典型的流動相中含有磷酸、醋酸或 Tris 的鈉鹽或鉀鹽。 流動相在使用 前需要脫氣。一個簡單的脫氣方法是將流動相在由水泵形成的真空下超聲 5min。
色譜柱的使用
1）新的Target-Gly 色譜柱的運輸溶劑是 20mM 磷酸鹽緩沖液（pH 6.0）。在儲存和運輸過程中， 填料可能會干涸。 第_一 次使用時，建議用 10-20 倍柱體積的運輸溶劑進行沖洗以活化色譜柱。 接著可用用戶自己選擇的流動相沖洗色譜柱 進行平衡。 流速由0.1mL/min 逐漸升至所需的操作條件，直至基線穩(wěn)定為止。 如果柱壓和基線波動較大，這可能是 氣泡進入了色譜柱中。這時可用較高流速沖洗色譜柱 3-10 分鐘，例如 4.0*33mm的色譜柱可采用流速 1.5-2.0mL/min。 如果 流動相的類型或 pH與色譜柱中的儲存溶劑差異較大，建議將色譜柱先用新的流動相沖洗 10 倍柱體積。
2）為了獲得*的分離 效果和延長柱的使用壽命， 請盡量使用 pH 在 2-10 范圍內(nèi)的流動相。
3）正常的操作壓力應當?shù)陀?,500psi
4）zui高操作溫度為 80℃。為了延長柱的使用壽命，請盡量在60℃范圍內(nèi)操作。
5）*不用時，Target-Gly色譜柱應保存在含 0.1%NaN3 的 20mM 磷酸鹽緩沖液（pH 6.0）中。色譜柱需要用 儲存緩 沖溶液沖洗至少20倍柱體積。然后再用隨色譜柱附上的兩個可拆卸的堵頭塞緊色譜柱的兩端以防止柱床的干涸。
色譜柱的清洗
在使用過程中，樣品經(jīng)常會被吸附在柱入口端的篩板或者填料上。當樣品吸附累積到一定程度時，柱壓將會升高，色譜峰形也會出現(xiàn)展寬。這時就需要清洗色譜柱了。下面是色譜柱清洗的基本步驟：
1）將色譜柱與檢測器斷開；
2）將色譜柱反接后進行沖洗；
3）將流速設(shè)置到所*的zui大流速的 50%進行沖洗。注意柱壓的變化。如果柱壓超出正常水平許多， 則需要降低 流速， 或選用低粘度的清洗溶液；
4）通常 10-15 倍柱體積的清洗溶液就足夠了。低 pH 的鹽溶液有助于去除堿性蛋白。 高 pH 的鹽溶液有助于去除酸性 蛋白。 有機溶劑可去除疏水蛋白。Target-Gly色譜柱清洗溶液為含 1.0M NaCl pH10的50mM 磷酸鹽緩沖液.
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