使用方法:
收到細(xì)胞后,請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。
1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶,75%酒精消毒,拆下封口膜,放入37℃,5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時(shí)或者過(guò)夜,以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 待細(xì)胞達(dá)到80%匯合時(shí)準(zhǔn)備進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
3. 細(xì)胞傳代
1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細(xì)胞一次;
2) 添加0.125%消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中,37℃溫浴3min左右;倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后吸棄消化液,再加入*培養(yǎng)液終止消化;
3) 用吸管輕輕吹打混勻,按1:2或1:3等適當(dāng)?shù)谋壤M(jìn)行接種傳代,然后補(bǔ)充新鮮的*培養(yǎng)基至5mL,放入37℃,5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
4) 待細(xì)胞*貼壁后,培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基。
公司細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng),質(zhì)量有保證、*、實(shí)驗(yàn)效果好,我司為您提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù),同時(shí)提供最新價(jià)格、說(shuō)明書、規(guī)格、用途、實(shí)驗(yàn)原理等相關(guān)操作說(shuō)明。
產(chǎn)品名稱 | 小鼠真皮毛乳頭細(xì)胞 |
規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 |
分類 | 原代細(xì)胞 |
貨號(hào) | GOY-01X1404 |
商品介紹:
名稱 小鼠真皮毛乳頭細(xì)胞 2.組織來(lái)源:皮膚組織 3.產(chǎn)品規(guī)格:5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡(jiǎn)介: 小鼠真皮毛乳頭細(xì)胞分離自皮膚毛囊組織;毛囊是表皮細(xì)胞連續(xù)形成的袋樣上皮。其基底是真皮凹進(jìn)的真皮毛乳頭,中心是一根毛發(fā),立毛肌的一側(cè)斜附在毛囊壁上,附著點(diǎn)的上方為皮脂腺通入毛囊的短頸,毛囊在皮膚表面的開口是毛囊孔。毛囊位于真皮和皮下組織中,毛囊向下伸入真皮約有一厘米深度,它是由包繞毛發(fā)與表皮相連的上皮鞘,以及皮脂腺和立毛肌所組成的一個(gè)結(jié)構(gòu)比較復(fù)雜的器官附件組織。毛囊實(shí)際上是由結(jié)締組織和上皮兩部分所組成,除了具有結(jié)締組織和血管的真皮乳頭(毛乳頭)外,毛囊其余部分都是由表皮細(xì)胞分化而來(lái)。真皮毛乳頭細(xì)胞位于毛囊基底部,是一類成纖維細(xì)胞。在毛囊發(fā)育早期,真皮細(xì)胞向單層上皮細(xì)胞發(fā)出第一真皮信號(hào),刺激上皮局部形成毛基板。隨后毛基板細(xì)胞向下方的真皮發(fā)出第一表皮信號(hào),誘導(dǎo)其形成有成纖維細(xì)胞組成的凝集細(xì)胞團(tuán)。在此過(guò)程中,毛母質(zhì)細(xì)胞逐漸包裹凝集細(xì)胞團(tuán),形成成熟的真皮毛乳頭細(xì)胞。作為毛囊中的重要細(xì)胞群,真皮毛乳頭細(xì)胞的分子機(jī)制和臨床應(yīng)用正在被逐漸認(rèn)識(shí)和解析。 5.方法簡(jiǎn)介: ()實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠真皮毛乳頭細(xì)胞采用膠原酶-中性混合消化法制備而來(lái),細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測(cè): ()實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠真皮毛乳頭細(xì)胞經(jīng)層粘連蛋白免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息: 包被條件PLL(0.1mg/ml) 培養(yǎng)基含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號(hào)CM-M312 換液頻率每2-3天換液一次; 生長(zhǎng)特性貼壁 細(xì)胞形態(tài)梭形、多角形 傳代特性可傳1-2代 消化液0.25% 培養(yǎng)條件氣相:空氣,95%;CO2,5% |
培養(yǎng)操作:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過(guò)夜)。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類;
1. 細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,細(xì)胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞,根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細(xì)胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液,注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
莫諾苷 規(guī)格: HPLC≥97%;20mg 訂購(gòu)|咨詢 人Slit2 ELISA試劑盒人96T0.156-10 ng/mL大鼠前列腺性(ACP3)ELISA試劑盒,英文名:ACP3 ELISA Kit
對(duì)羥基(尼泊爾金酯) 規(guī)格: HPLC≥99%;100mg 訂購(gòu)|咨詢 人IKBKE ELISA試劑盒人96T78-5000 pg/mL小鼠成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子18(FGF18)ELISA試劑盒,英文名:FGF18 ELISA Kit
山柰-3-O-蕓香糖苷 訂購(gòu)|咨詢 規(guī)格: 10mg 低分子量蛋白7抗體
小鼠真皮毛乳頭細(xì)胞膽硫乳瓊脂(DHL) 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)Deoxycholate Hydrogen Sulfide Lactose Agar腸道菌選擇性培養(yǎng)基,特別是沙門氏菌的選擇性分離(GB、SN標(biāo)準(zhǔn))250兔子蛋白聚糖(ACAN)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
三糖鐵瓊脂(TSI) 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)Triple Sugar Iron Agar生化培養(yǎng)基,用于腸桿菌科細(xì)菌的生化反應(yīng)篩選(GB、SN標(biāo)準(zhǔn))250兔子酯轉(zhuǎn)移蛋白(CETP)免疫試劑盒*直銷
SS 瓊脂 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)Salmonella Shigella Agar用于沙門氏菌,志賀氏菌的選擇性分離培養(yǎng)(GB標(biāo)準(zhǔn))250兔子單核細(xì)胞趨化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝
亞利桑那菌瓊脂(SA) 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)Salmonella Arizona Agar用于亞利桑那沙門氏菌的選擇性分離(SN標(biāo)準(zhǔn))100兔子催乳素(PRL/LTH)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝
氯化鎂孔雀綠肉湯(MM,RV Medium) 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)Rappaport-Vassiliadis Mdeium用于沙門氏菌的選擇性增菌培養(yǎng)(GB標(biāo)準(zhǔn))250兔子促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
HE 瓊脂(HE) 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)Hektoen Enteric Agar用于沙門氏菌的選擇性分離培養(yǎng)(FDA標(biāo)準(zhǔn))250兔子促卵泡素(FSH)免疫試劑盒*直銷
賴脫羧培養(yǎng)基 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)Lysine-decarboxylase Test Broth生化培養(yǎng)基,賴脫羧試驗(yàn)(GB、SN標(biāo)準(zhǔn))5兔子促甲狀腺素(TSH)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝
尿素瓊脂基礎(chǔ) 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)Urease Agar Base 生化培養(yǎng)基,用于細(xì)菌脲檢測(cè)(GB、SN標(biāo)準(zhǔn))250兔子雌二醇(E2)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝
40%尿素水 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)40%Urea Water加入尿素瓊脂基礎(chǔ)5ml*10兔子腸脂肪酸結(jié)合蛋白(iFABP)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
V-P 半固體瓊脂 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)Voges-Proskauer Semisolid Agar生化培養(yǎng)基,用于細(xì)菌V-P試驗(yàn)(SN標(biāo)準(zhǔn))250兔子層連蛋白/板層素(LN)免疫試劑盒*直銷