組成及試劑配制:
1、甲型流感病毒(IAV)核酸檢測試劑盒方法廠家酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 價格 |
甲型流感病毒(IAV)核酸檢測試劑盒方法廠家 | 48T | 電詢 |
樣本采集、存放及運輸:
1、樣本采集:各類型樣本按照常規(guī)方法采集;
2、存放:樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過72h,-70℃以下可長期保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融(多凍融3次);
3、運輸:采用泡沫箱加冰密封進行運輸。
【標本要求】
人體鼻腔或咽部分泌物:用無菌捻拭子拭取鼻腔或咽部分泌物,將分泌物或咽拭子置入無菌玻璃管(含0.4ml滅菌生理鹽水),用無菌棉球?qū)⒃嚬苋o后,密閉送檢。標本可立即用于檢測,也可保存于-20℃待測。
【檢驗方法】
1.標本、對照品的核酸裂解處理
用商品化(取得醫(yī)療器械許可證)的RNA提取試劑盒處理標本,具體操作參見該試劑盒說明書。
或用Trizol法提取,方法如下:取100?l樣品置于1.5ml 離心管中,加入300?l裂解液(Trizol),再加入100, 混勻器上振蕩混勻5sec或顛倒混勻15次; 13000rpm離心15min, 吸取上層液體,加入等體積異丙醇,顛倒混勻室溫靜置10min, 13000rpm離心10min,輕輕倒去上清;加入700?l 75%乙醇,顛倒洗滌,13000rpm離心5min,輕輕倒去上清,倒置于吸水紙上,棄盡液體或4000rpm離心5sec,將管壁上的殘余液體甩到管底部,用微量加樣器盡量吸干液體,加入20?l DEPC-H2O溶解RNA。
2.試劑配制
取n×19?l H7N9核酸熒光PCR檢測混合液與n×1?l RT-PCR酶(n為反應(yīng)管數(shù)),振蕩混勻數(shù)秒, 3000rpm離心數(shù)秒。
3.加樣取上述混合液20?l置于PCR管中,然后將樣品核酸提取液、DEPC-H2O、陽性對照品各5?l分別加入PCR管中,蓋好管蓋,立即進行PCR擴增反應(yīng)。
4. PCR擴增反應(yīng)管置于定量熒光PCR儀上,推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置:
45℃×10min; 95℃×15min;循環(huán)一次,再按95℃×15sec→60℃×60sec,循環(huán)45次;單點熒光檢測在60℃,反應(yīng)體系為25?l。
熒光通道檢測選擇:選用FAM通道。
THP ELISA Kit補體C3dg片段抗體TH糖蛋白(THP)ELISA試劑盒
TIEG1 ELISA Kit補體C3g片段抗體TGF-β誘導(dǎo)早期基因1(TIEG1)ELISA試劑盒
TAU ELISA Kit補體C3d片段抗體Tau蛋白(TAU)ELISA試劑盒
TAU-231 ELISA KitCD28抗體Tau-231蛋白(TAU-231)ELISA試劑盒
TAU-181 ELISA KitF肌動蛋白α2亞基抗體Tau-181蛋白(TAU-181)ELISA試劑盒
TARDBP/TDP43 ELISA Kit環(huán)磷酸腺苷反應(yīng)元件調(diào)節(jié)蛋白抗體TAR DNA結(jié)合蛋白43(TARDBP/TDP43)ELISA試劑盒
SAH ELISA Kit胱抑素A/半胱氨酸蛋白酶抑制劑A抗體s腺苷同型半胱氨酸(SAH)ELISA試劑盒
SDC3 ELISA Kit氯離子通道蛋白27抗體Syndecan-3/(SDC3)ELISA試劑盒
SDC1 ELISA Kit緊密連接蛋白8抗體Syndecan-1/CD138(SDC1)ELISA試劑盒
Steap4 ELISA Kit磷酸化半胱氨酸蛋白酶9抗體STEAP家族成員4(Steap4)ELISA試劑盒
Steap1 ELISA Kit磷酸化細胞分裂周期蛋白25B抗體STEAP家族成員1(Steap1)ELISA試劑盒
STMN1 ELISA Kit磷酸化P27抗體/周期素依賴激酶抑制劑抗體Stathmin 1(STMN1)ELISA試劑盒
PIAS3 ELISA Kit磷酸化P27抗體/周期素依賴激酶抑制劑抗體STAT3蛋白抑制分子(PIAS3)ELISA試劑盒
SMOC2 ELISA Kit磷酸化P27抗體/周期素依賴激酶抑制劑抗體SPARC相關(guān)模塊化鈣結(jié)合蛋白2(SMOC2)ELISA試劑盒
SMOC1 ELISA Kit磷酸化p21蛋白抗體SPARC相關(guān)模塊化鈣結(jié)合蛋白1(SMOC1)ELISA試劑盒
SHC1 ELISA Kit磷酸化p21蛋白抗體SHC轉(zhuǎn)化蛋白1(SHC1)ELISA試劑盒
SHC/SLP-76 ELISA Kit8號染色體開放閱讀框84抗體SH2攜帶蛋白(SHC/SLP-76)ELISA試劑盒
Salusin β ELISA Kit磷酸化p21蛋白抗體Salusin Beta(Salusin β)ELISA試劑盒
Salusin α ELISA Kit磷酸化轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子CEBP α 抗體Salusin Alpha(Salusin α)ELISA試劑盒
SAALDL ELISA KitCLEC2D蛋白抗體SAALDL復(fù)合物(SAALDL)ELISA試劑盒
S100P ELISA Kit富含半胱氨酸與表皮生長因子樣蛋白2抗體S100鈣結(jié)合蛋白P(S100P)ELISA試劑盒
S100A9 ELISA Kit醌氧化還原酶樣蛋白1抗體S100鈣結(jié)合蛋白A9/鈣粒蛋白B(S100A9)ELISA試劑盒
S100A8 ELISA Kit銅代謝結(jié)構(gòu)域蛋白9抗體S100鈣結(jié)合蛋白A8/鈣粒蛋白A(S100A8)ELISA試劑盒
S100A8/A9 ELISA Kit濃縮素2復(fù)合亞基D3抗體S100鈣結(jié)合蛋白A8/A9復(fù)合物(S100A8/A9)ELISA試劑盒
S100A6 ELISA Kit磷酸化細胞分裂周期蛋白6抗體S100鈣結(jié)合蛋白A6/鈣粒蛋白A(S100A6)ELISA試劑盒
S100A12 ELISA Kit磷酸化周期素依賴激酶2抗體S100鈣結(jié)合蛋白A12/鈣粒蛋白C(S100A12)ELISA試劑盒
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個堿基,應(yīng)嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。