組成及試劑配制:
1、布氏岡比亞錐蟲品牌酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 價格 |
布氏岡比亞錐蟲品牌 | Trypanosoma brucei gambiense | 電詢 |
樣本采集、存放及運輸:
1、樣本采集:各類型樣本按照常規(guī)方法采集;
2、存放:樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過72h,-70℃以下可長期保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融(多凍融3次);
3、運輸:采用泡沫箱加冰密封進行運輸。
【標本要求】
人體鼻腔或咽部分泌物:用無菌捻拭子拭取鼻腔或咽部分泌物,將分泌物或咽拭子置入無菌玻璃管(含0.4ml滅菌生理鹽水),用無菌棉球?qū)⒃嚬苋o后,密閉送檢。標本可立即用于檢測,也可保存于-20℃待測。
【檢驗方法】
1.標本、對照品的核酸裂解處理
用商品化(取得醫(yī)療器械許可證)的RNA提取試劑盒處理標本,具體操作參見該試劑盒說明書。
或用Trizol法提取,方法如下:取100?l樣品置于1.5ml 離心管中,加入300?l裂解液(Trizol),再加入100, 混勻器上振蕩混勻5sec或顛倒混勻15次; 13000rpm離心15min, 吸取上層液體,加入等體積異丙醇,顛倒混勻室溫靜置10min, 13000rpm離心10min,輕輕倒去上清;加入700?l 75%乙醇,顛倒洗滌,13000rpm離心5min,輕輕倒去上清,倒置于吸水紙上,棄盡液體或4000rpm離心5sec,將管壁上的殘余液體甩到管底部,用微量加樣器盡量吸干液體,加入20?l DEPC-H2O溶解RNA。
2.試劑配制
取n×19?l H7N9核酸熒光PCR檢測混合液與n×1?l RT-PCR酶(n為反應(yīng)管數(shù)),振蕩混勻數(shù)秒, 3000rpm離心數(shù)秒。
3.加樣取上述混合液20?l置于PCR管中,然后將樣品核酸提取液、DEPC-H2O、陽性對照品各5?l分別加入PCR管中,蓋好管蓋,立即進行PCR擴增反應(yīng)。
4. PCR擴增反應(yīng)管置于定量熒光PCR儀上,推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置:
45℃×10min; 95℃×15min;循環(huán)一次,再按95℃×15sec→60℃×60sec,循環(huán)45次;單點熒光檢測在60℃,反應(yīng)體系為25?l。
熒光通道檢測選擇:選用FAM通道。
PCDHα12 ELISA Kit腦衰蛋白反應(yīng)調(diào)節(jié)蛋白4抗體原鈣黏素α12(PCDHα12)ELISA試劑盒
PCDHα11 ELISA Kit卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白87抗體原鈣黏素α11(PCDHα11)ELISA試劑盒
PCDHα10 ELISA Kit卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白92抗體原鈣黏素α10(PCDHα10)ELISA試劑盒
PCDHα1 ELISA Kit卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白CHCHD8抗體原鈣黏素α1(PCDHα1)ELISA試劑盒
PCDH9 ELISA Kit大腦亮氨酸拉鏈結(jié)構(gòu)域蛋白抗體原鈣黏素9(PCDH9)ELISA試劑盒
PCDH8 ELISA Kit卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白93抗體原鈣黏素8(PCDH8)ELISA試劑盒
PCDH7 ELISA Kit卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白96抗體原鈣黏素7(PCDH7)ELISA試劑盒
PCDH24 ELISA Kit卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白CHCHD5抗體原鈣黏素24(PCDH24)ELISA試劑盒
PCDH22 ELISA Kit卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白CHCHD6抗體原鈣黏素22(PCDH22)ELISA試劑盒
PCDH21 ELISA Kit卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白CHCHD6抗體原鈣黏素21(PCDH21)ELISA試劑盒
PCDH20 ELISA Kit細胞周期通道和神經(jīng)細胞分化蛋白1抗體原鈣黏素20(PCDH20)ELISA試劑盒
PCDH19 ELISA Kit凝集蛋白家族10抗體原鈣黏素19(PCDH19)ELISA試劑盒
PCDH18 ELISA Kit銅代謝結(jié)構(gòu)域蛋白7抗體原鈣黏素18(PCDH18)ELISA試劑盒
PCDH17 ELISA KitCOMM結(jié)構(gòu)域蛋白4抗體原鈣黏素17(PCDH17)ELISA試劑盒
PCDH15 ELISA KitCordon bleu蛋白樣1抗體原鈣黏素15(PCDH15)ELISA試劑盒
PCDH12 ELISA Kit凝集蛋白家族11抗體原鈣黏素12(PCDH12)ELISA試劑盒
PCDH11 ELISA Kit銅代謝結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體原鈣黏素11(PCDH11)ELISA試劑盒
PCDH10 ELISA Kit20號染色體開放閱讀框96抗體原鈣黏素10(PCDH10)ELISA試劑盒
PPOX ELISA Kit3號染色體開放閱讀框26抗體原卟啉原氧化酶(PPOX)ELISA試劑盒
EPP ELISA Kit細胞粘附分子2抗體原卟啉(EPP)ELISA試劑盒
PRM3 ELISA Kit耳聾-甲狀腺腫綜合征相關(guān)COBL蛋白抗體魚精蛋白3(PRM3)ELISA試劑盒
PRM2 ELISA Kit20號染色體開放閱讀框195抗體魚精蛋白2(PRM2)ELISA試劑盒
AMELY ELISA Kit7號染色體開放閱讀框62抗體釉原蛋白Y-連鎖(AMELY)ELISA試劑盒
AMELX ELISA Kit9號染色體開放閱讀框174抗體釉原蛋白X-連鎖(AMELX)ELISA試劑盒
AMTN ELISA Kit6號染色體開放閱讀框64抗體釉成熟蛋白(AMTN)ELISA試劑盒
NOS2 ELISA Kit免疫球蛋白G Fc段受體Ⅱ抗體誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(NOS2)ELISA試劑盒
OSCP1 ELISA Kit透明質(zhì)酸介導(dǎo)細胞游走受體抗體有機溶質(zhì)載體伴侶1(OSCP1)ELISA試劑盒
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個堿基,應(yīng)嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。