組成及試劑配制:
1、四輻射鳥圓線蟲PCR檢測試劑盒價(jià)格酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 價(jià)格 |
四輻射鳥圓線蟲PCR檢測試劑盒價(jià)格 | Abalone Spherical VirusPCR | 電詢 |
樣本采集、存放及運(yùn)輸:
1、樣本采集:各類型樣本按照常規(guī)方法采集;
2、存放:樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過72h,-70℃以下可長期保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融(多凍融3次);
3、運(yùn)輸:采用泡沫箱加冰密封進(jìn)行運(yùn)輸。
【標(biāo)本要求】
人體鼻腔或咽部分泌物:用無菌捻拭子拭取鼻腔或咽部分泌物,將分泌物或咽拭子置入無菌玻璃管(含0.4ml滅菌生理鹽水),用無菌棉球?qū)⒃嚬苋o后,密閉送檢。標(biāo)本可立即用于檢測,也可保存于-20℃待測。
【檢驗(yàn)方法】
1.標(biāo)本、對照品的核酸裂解處理
用商品化(取得醫(yī)療器械許可證)的RNA提取試劑盒處理標(biāo)本,具體操作參見該試劑盒說明書。
或用Trizol法提取,方法如下:取100?l樣品置于1.5ml 離心管中,加入300?l裂解液(Trizol),再加入100, 混勻器上振蕩混勻5sec或顛倒混勻15次; 13000rpm離心15min, 吸取上層液體,加入等體積異丙醇,顛倒混勻室溫靜置10min, 13000rpm離心10min,輕輕倒去上清;加入700?l 75%乙醇,顛倒洗滌,13000rpm離心5min,輕輕倒去上清,倒置于吸水紙上,棄盡液體或4000rpm離心5sec,將管壁上的殘余液體甩到管底部,用微量加樣器盡量吸干液體,加入20?l DEPC-H2O溶解RNA。
2.試劑配制
取n×19?l H7N9核酸熒光PCR檢測混合液與n×1?l RT-PCR酶(n為反應(yīng)管數(shù)),振蕩混勻數(shù)秒, 3000rpm離心數(shù)秒。
3.加樣取上述混合液20?l置于PCR管中,然后將樣品核酸提取液、DEPC-H2O、陽性對照品各5?l分別加入PCR管中,蓋好管蓋,立即進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)。
4. PCR擴(kuò)增反應(yīng)管置于定量熒光PCR儀上,推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置:
45℃×10min; 95℃×15min;循環(huán)一次,再按95℃×15sec→60℃×60sec,循環(huán)45次;單點(diǎn)熒光檢測在60℃,反應(yīng)體系為25?l。
熒光通道檢測選擇:選用FAM通道。
RAMP2 ELISA Kit磷酸化雌激素受體ER alpha 抗體受體活性修飾蛋白2(RAMP2)ELISA試劑盒
NCF4 ELISA Kit重組增強(qiáng)型綠色熒光蛋白抗體嗜中性粒細(xì)胞胞漿因子4(NCF4)ELISA試劑盒
NCF2 ELISA Kit雌激素受體α抗體嗜中性粒細(xì)胞胞漿因子2(NCF2)ELISA試劑盒
EPX ELISA Kit雌激素受體α/β抗體嗜酸性粒細(xì)胞過氧化物酶(EPX)ELISA試劑盒
ECF ELISA Kit自分泌運(yùn)動因子抗體嗜酸粒細(xì)胞趨化因子(ECF)ELISA試劑盒
BTN1A1 ELISA Kit酪氨酸蛋白激酶A3受體抗體嗜乳脂蛋白亞家族1成員A1(BTN1A1)ELISA試劑盒
CHGB ELISA KitEHM2蛋白抗體嗜鉻蛋白B(CHGB)ELISA試劑盒
CHGA ELISA Kit磷酸化真核翻譯起始因子4E抗體嗜鉻蛋白A(CHGA)ELISA試劑盒
RHO ELISA Kit翻譯延伸因子EF-1a抗體視紫質(zhì)(RHO)ELISA試劑盒
VSNL1 ELISA Kit磷酸化雌激素受體α抗體視錐蛋白樣蛋白1(VSNL1)ELISA試劑盒
RS ELISA Kit磷酸化表皮生長因子受體抗體視網(wǎng)膜劈裂蛋白(RS)ELISA試劑盒
RB1 ELISA Kit磷酸化絲裂原活化蛋白激酶1抗體視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤蛋白1(RB1)ELISA試劑盒
RCAD ELISA Kit磷酸化絲裂原活化蛋白激酶1/2抗體視網(wǎng)膜鈣黏附蛋白(RCAD)ELISA試劑盒
OPA3 ELISA Kit酪氨酸蛋白激酶受體B4抗體視神經(jīng)蛋白3(OPA3)ELISA試劑盒
OPTN ELISA Kit酪氨酸蛋白激酶A5受體抗體視神經(jīng)病變誘導(dǎo)反應(yīng)蛋白(OPTN)ELISA試劑盒
RDH8 ELISA Kit上皮鈉離子通道蛋白γ/γENaC抗體視黃醇脫氫酶8(RDH8)ELISA試劑盒
RDH5 ELISA Kit癌基因ETS2抗體視黃醇脫氫酶5(RDH5)ELISA試劑盒
RDH15 ELISA Kit內(nèi)皮素3抗體視黃醇脫氫酶15(RDH15)ELISA試劑盒
RDH14 ELISA Kit磷酸化細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶5抗體視黃醇脫氫酶14(RDH14)ELISA試劑盒
RDH13 ELISA Kit磷酸化細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶5抗體視黃醇脫氫酶13(RDH13)ELISA試劑盒
RDH12 ELISA Kit細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶4抗體視黃醇脫氫酶12(RDH12)ELISA試劑盒
RDH11 ELISA Kit腸出血性大腸桿菌埃希氏菌O157:H7抗體視黃醇脫氫酶11(RDH11)ELISA試劑盒
RDH10 ELISA Kit磷酸化絲裂原活化蛋白激酶ERK抗體視黃醇脫氫酶10(RDH10)ELISA試劑盒
RBP3 ELISA KitCD312抗體視黃醇結(jié)合蛋白3(RBP3)ELISA試劑盒
RBP1 ELISA KiteIF4E結(jié)合蛋白抗體視黃醇結(jié)合蛋白1(RBP1)ELISA試劑盒
RETSAT ELISA Kit磷酸化表皮生長因子受體抗體視黃醇飽和酶(RETSAT)ELISA試劑盒
OPN5 ELISA Kit磷酸化表皮生長因子受體抗體視蛋白5(OPN5)ELISA試劑盒
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn), 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。