操作步驟:
1.編號(hào):將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照 2 孔、陽性對(duì)照 2 孔、空白對(duì)照 1孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)
2.加樣:分別在陰、陽性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽性對(duì)照 50μl。然后在待測(cè)樣品孔先 加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測(cè)樣品 10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,
3.溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4.配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用。
5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此 重復(fù) 5 次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl,空白孔除外。
7.溫育:操作同 3。
8.洗滌:操作同 5。
9.顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10 分鐘.
10.終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11.測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD 值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止 液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
服務(wù):
我們可以根據(jù)您的應(yīng)用需要,比如在檢測(cè)范圍、種屬以及靈敏度等方面有特殊要求,而量身定制檢測(cè)試劑盒,有效控制檢測(cè)試劑成本。并可提供免費(fèi)代測(cè)。
產(chǎn)品名稱 | 人葡萄糖激酶(GCK)ELISA檢測(cè)試劑盒 |
英文名稱 | Human glucokinase (GCK) ELISA Kit |
貨號(hào) | YS-H11931 |
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試劑配制
1、酶聯(lián)板(Assay plate ):一塊(96孔或者48孔)。
2、標(biāo)準(zhǔn)品(Standard):2瓶(凍干品)。
3、樣品稀釋液(Sample Diluent):1×20ml/瓶。
4、生物素標(biāo)記抗體稀釋液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。
5、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 (HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。
6、生物素標(biāo)記抗體(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)
7、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100)
8、底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。
9、濃洗滌液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10、終止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。
樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備:
ELISA試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(2)血漿:
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(3)尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。
(4)細(xì)胞培養(yǎng)上清:
檢測(cè)分泌性的成份時(shí),用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。
(5)培養(yǎng)細(xì)胞
檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(6)組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備用。
17號(hào)染色體開放閱讀框49抗體 規(guī)格: 0.2ml 英文名稱:C17orf49
細(xì)胞表面趨化因子受體8抗體 規(guī)格: 0.1ml 英文名稱:CCR8
碳酸酐酶1抗體 規(guī)格: 0.2ml 英文名稱:CA I
核DNA結(jié)合蛋白C1D抗體 規(guī)格: 0.1ml 英文名稱:C1D
20號(hào)染色體開放閱讀框79抗體 規(guī)格: 0.2ml 英文名稱:C20orf79
磷酸化非受體酪氨酸激酶c-Abl抗體 規(guī)格: 0.1ml 英文名稱:phospho-c-Abl (Tyr185)
膠原蛋白11A2抗體 規(guī)格: 0.2ml 英文名稱:Collagen XI alpha 2
卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白34抗體 規(guī)格: 0.2ml 英文名稱:CCDC34
11號(hào)染色體開放閱讀框53抗體 規(guī)格: 0.2ml 英文名稱:C11orf53
細(xì)胞色素P450ⅡE1抗體 規(guī)格: 0.1ml 英文名稱:CYP2E1
組織蛋白酶D抗體 規(guī)格: 0.1ml 英文名稱:Cathepsin D
CD96抗體 規(guī)格: 0.2ml 英文名稱:CD96
補(bǔ)體C5抗體 規(guī)格: 0.2ml 英文名稱:C5
環(huán)磷酸苷反應(yīng)元件調(diào)節(jié)蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml 英文名稱:CREM
人葡萄糖激酶(GCK)ELISA檢測(cè)試劑盒大鼠凋亡誘導(dǎo)因子(AIF)ELISA試劑盒 英文名: AIF ELISA Kit
大鼠凋亡相關(guān)因子配體(FASL)ELISA試劑盒 英文名: FASL ELISA Kit
大鼠凋亡相關(guān)因子(FAS/CD95)ELISA試劑盒 英文名: FAS/CD95 ELISA Kit
大鼠淀粉樣前體蛋白(βAPP)ELISA試劑盒 英文名: βAPP ELISA Kit
大鼠第八因子相關(guān)抗原(FⅧAg)ELISA試劑盒 英文名: FⅧAg ELISA Kit
大鼠抵抗素樣α(Retnla)ELISA試劑盒 英文名: Retnla ELISA Kit
大鼠抵抗素(Resistin)ELISA試劑盒 英文名: Resistin ELISA Kit
大鼠低氧誘導(dǎo)因子1α(HIF-1α)ELISA試劑盒 英文名: HIF-1α ELISA Kit
大鼠低密度脂蛋白受體(LDLR)ELISA試劑盒 英文名: LDLR ELISA Kit
大鼠低密度脂蛋白免疫復(fù)合物(LDL-IC)ELISA試劑盒 英文名: LDL-IC ELISA Kit
大鼠低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)ELISA試劑盒 英文名: LDL-C ELISA Kit
大鼠低密度脂蛋白(LDL)ELISA試劑盒 英文名: LDL ELISA Kit
大鼠蛋白磷酸酶(PP)ELISA試劑盒 英文名: PP ELISA Kit