使用方法:
收到細胞后,請按照以下方法進行操作。
1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶,75%酒精消毒,拆下封口膜,放入37℃,5% CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時或者過夜,以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 待細胞達到80%匯合時準備進行傳代培養(yǎng)。
3. 細胞傳代
1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細胞一次;
2) 添加0.125%消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中,37℃溫浴3min左右;倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后吸棄消化液,再加入*培養(yǎng)液終止消化;
3) 用吸管輕輕吹打混勻,按1:2或1:3等適當?shù)谋壤M行接種傳代,然后補充新鮮的*培養(yǎng)基至5mL,放入37℃,5% CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
4) 待細胞*貼壁后,培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基。
公司細胞現(xiàn)貨供應,質(zhì)量有保證、*、實驗效果好,我司為您提供免費代測服務,同時提供最新價格、說明書、規(guī)格、用途、實驗原理等相關(guān)操作說明。
產(chǎn)品名稱 | 小鼠陰道壁成纖維細胞 |
規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 |
分類 | 原代細胞 |
貨號 | GOY-01X1416 |
商品介紹:
名稱 小鼠陰道壁成纖維細胞 2.組織來源:陰道組織 3.產(chǎn)品規(guī)格:5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 4.細胞簡介: 小鼠陰道壁成纖維細胞分離自陰道組織;陰道位于膀胱、尿道和直腸之間,是一個富有彈性的管狀器官。它在人類生殖過程中具有多種生理功能,是連接子宮與外陰的通道,是排出月經(jīng)血、娩出嬰兒的必經(jīng)之路,也是一個重要的性交器官。陰道壁按組織學由外到內(nèi)分三層,即黏膜層、肌層和外膜。1)黏膜層由上皮和固有膜組成。上皮較厚,為復層鱗狀上皮,從基底層到表層由基底層、旁基底層、中間層和表層組成。沒有角化層。陰道粘膜的基底層呈細波紋狀起伏。2)肌層由平滑肌組織構(gòu)成,肌束排列不規(guī)則,縱行和環(huán)形互相交錯。肌束間有較多的結(jié)締組織和彈性纖維。陰道外口有環(huán)形的橫紋肌稱括約肌。3)外膜層為纖維膜,由結(jié)締組織構(gòu)成,內(nèi)含豐富的彈性纖維、靜脈叢、淋巴管和神經(jīng)。大鼠陰道壁成纖維細胞主要分離自外膜層,成纖維細胞(Fibroblast)是疏松結(jié)締組織的主要細胞成分,由胚胎時期的間充質(zhì)細胞分化而來。成纖維細胞較大,輪廓清楚,多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu),其細胞核呈規(guī)則的卵圓形,核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛,細胞質(zhì)嗜弱堿性,具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動,在一定條件下,它可以實現(xiàn)跟纖維細胞的互相轉(zhuǎn)化;成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用。 5.方法簡介: ()實驗室分離的小鼠陰道壁成纖維細胞采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測: ()實驗室分離的小鼠陰道壁成纖維細胞經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息: 培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號CM-R325 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態(tài)成纖維細胞樣 傳代特性可傳2-3代左右;2代以內(nèi)狀態(tài)最佳 消化液0.25% 培養(yǎng)條件氣相:空氣,95%;CO2,5% |
培養(yǎng)操作:
1)復蘇細胞:將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜(或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并 檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類;
1. 細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,細胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞,根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液,注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
遠志(標準品) 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品 Polygalacic acid A-375(人惡性黑色素瘤細胞)PBS
曲格列汀琥珀鹽 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR Trelagliptin succinate;SYR-472 Hela S3(人宮頸細胞)小鼠皮層神經(jīng)膠質(zhì)細胞(EGFP標記)
蘭雪醌,白花丹醌,白花丹素(標準品) 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,進口標準品 Plumbagin 釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiaeJAR(人胎盤絨毛膜細胞)
對 訂購|咨詢 規(guī)格: 10
小鼠陰道壁成纖維細胞多價蛋白胨-酵母膏 (PY) 培養(yǎng)基 進口、國產(chǎn)Poly Peptone Yeast Extract Medium用于產(chǎn)氣莢膜梭菌的培養(yǎng)(SN標準)250兔淋巴細胞功能相關(guān)抗原3(LFA-3/CD58)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應
皰肉培養(yǎng)基基礎 進口、國產(chǎn)Cooked Meat Medium Base加入牛肉粒,用于肉毒梭菌及厭氧梭狀芽孢桿菌的檢驗(GB標準)250兔粒細胞集落刺激因子(G-CSF)免疫試劑盒*直銷
皰肉牛肉粒 進口、國產(chǎn)Dried Meat Particle加入皰肉基礎中,配成皰肉培養(yǎng)基100兔可溶性凋亡相關(guān)因子(sFAS/Apo-1)免疫試劑盒進口、組裝
卵黃瓊脂培養(yǎng)基基礎 進口、國產(chǎn)Egg Yolk Agar Base用于肉毒梭菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌的分離培養(yǎng)(GB標準)250兔抗糖蛋白抗體(GP)免疫試劑盒進口、分裝
含鐵牛奶培養(yǎng)基進口、國產(chǎn)用于產(chǎn)氣莢膜梭菌的牛奶發(fā)酵試驗250兔抗平滑肌抗體(ASMA) 免疫試劑盒現(xiàn)貨供應
梭菌鑒別瓊脂(DCA)進口、國產(chǎn)Differentia Clostridial Agar用于干燥食品的計數(shù)和培養(yǎng)(MERCK方法)250兔抗凝血III(SERPINC1)免疫試劑盒*直銷
強化梭菌鑒別瓊脂(DRCA)進口、國產(chǎn)Differentia Reinforced Clostridial Agar用于食品和其它物質(zhì)中梭菌的計數(shù)和培養(yǎng)(MERCK方法)250兔抗腦組織抗體(ABAb)免疫試劑盒進口、組裝
強化梭菌瓊脂進口、國產(chǎn)Reinforced Clostridium Agar用于梭菌的分離培養(yǎng)(MERCK方法)250兔抗內(nèi)皮細胞抗體(AECA)免疫試劑盒進口、分裝
強化梭菌培養(yǎng)基(RCM)進口、國產(chǎn)Reinforced Clostridium Medium用于梭菌的分離培養(yǎng)(Merck方法)250兔抗單核細胞抗體(AMA)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應
TSN 瓊脂進口、國產(chǎn)TSN Agar用于產(chǎn)氣莢膜梭菌的平板計數(shù)(Merck方法)250兔膠原吡啶交聯(lián)(PYD)免疫試劑盒*直銷