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產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 檢測(cè)方法 | 貨號(hào) |
100管/96樣 | 微量法 | GOY-01S6931 |
商品介紹
測(cè)定意義 MAO(EC1.4.3.4) 主要存在于脊椎動(dòng)物的各種器官,特別是分泌腺、腦、肝臟,在無(wú)脊椎動(dòng)物、豆類的芽等植物中也存在催化單胺類物質(zhì)代謝,含量較低,具有重要的生理功能,其活性能反映肝纖維化的程度。此外,MAO活性異常導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)運(yùn)轉(zhuǎn)出現(xiàn)紊亂,從而引發(fā)多種病癥。 測(cè)定原理: MAO催化單胺類底物脫氨生成相應(yīng)的醛,進(jìn)一步氧化成酸;底物在360nm處有特征吸收峰,測(cè)定360nm光吸收下降的速率,計(jì)算MAO活性。 自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器: 天平、低溫離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、蒸餾水。 |
試劑的組成和配制:
提取液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存;
試劑一:液體 5mL×1 瓶,4℃保存;
試劑二:液體 200μL×1 支,4℃保存;
試劑三:液體 4mL×1 瓶,4℃保存;
試劑四:粉劑×2 瓶,4℃保存。
所需的儀器和用品:
可見(jiàn)分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的測(cè)定:
建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定,了解本批樣品情況,熟悉實(shí)驗(yàn)流程,避免實(shí)驗(yàn)
樣本和試劑浪費(fèi)!
1、樣本制備
① 組織樣本:
取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進(jìn)行
勻漿(或使用各類常見(jiàn)勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測(cè)液。
【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進(jìn)行提取
② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本:
先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL
提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);
12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。
【注】:若增加樣本量,可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量(10
4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測(cè);若渾濁,離心后取上清檢測(cè)。
注意事項(xiàng):
1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時(shí)在冰上放置。
2、對(duì)照管只需要做一管。
3、若對(duì)照管吸光值大于 1,建議將試劑二用蒸餾水稀釋 7 倍后使用(10μL 試劑二原液+60μL蒸餾水)。
4、SOD為什么有的樣本測(cè)定管大于對(duì)照管,對(duì)照管數(shù)值在什么范圍?對(duì)照管的范圍是 0.4-1。對(duì)照管吸光值過(guò)低可能是(1)試劑二或試劑四沒(méi)有現(xiàn)配現(xiàn)用;
(2)沒(méi)有按順序加試劑;(3)反應(yīng)時(shí)間不夠,可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間(反應(yīng)時(shí)間 30min可以延長(zhǎng)到 40min)。對(duì)照管吸光值過(guò)高可能是試劑二未按操作說(shuō)明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測(cè)定管大于對(duì)照管,可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,為了降低雜質(zhì)的影響一般
將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋 10倍后再測(cè),通??梢允箿y(cè)定正常。
少突膠質(zhì)髓鞘相關(guān)蛋白抗體Human NDUFV1 ELISA Kit射干苷
CDC42結(jié)合蛋白激α抗體(MRCKα)Human NDUFV2 ELISA Kit西紅花苷-Ⅱ
髓樣分化蛋白抗體Human SERPINF1(Pigment epithelium-derived factor) ELISA KitL-甲酯
外周髓磷脂P0蛋白/P0蛋白抗體Human NDUFV3 ELISA Kit千金藤素
褪黑素受體1A/松果體素受體1A抗體Human NDRG2(N-myc downstream-regulated gene 2 protein) ELISA KitD-甲酯鹽酸鹽
肌生成素抗體Human NDUFB5 ELISA KitHot Taq
化髓鞘轉(zhuǎn)錄因子1抗體Human NDUFA4L2 ELISA Kit酪醇
DNA損傷關(guān)鍵蛋白Mre11抗體Human NDUFA3 ELISA Kit香荊芥酚
單胺氧化酶(MAO)微量法檢測(cè)試劑盒大鼠孕激素/孕酮(PROG)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝
15-羥基前列腺素脫氫(15-PGDH)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝
白介素1β轉(zhuǎn)換(ICE)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
馬雌激素(E)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
抗麥膠蛋白抗體(IgG)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝
抗磷脂??贵w(IgG)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝
殺菌肽(cecropin)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝
大鼠多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(DAT)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
連蛋白(zonulin)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
腺核苷酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(ANT)自身抗體免疫試劑盒進(jìn)口、組裝
測(cè)定步驟:
1、 酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至450nm。
2、 試劑三的稀釋:將試劑三用蒸餾水稀釋50倍,用多少配多少。(試劑三和蒸餾水1:49稀釋。
3、 工作液配制:在試劑一加入100μl試劑二,充分混勻。配好的試劑4℃避光可保存一周。(若一次性測(cè)定樣本較少,可按照實(shí)際用量將試劑一和試劑二按照20ml:0.1ml的比例混勻配制)
4、 將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解(溶解后一周內(nèi)用完)。
5、 樣本測(cè)定(在96孔板中依次加入下列試劑)
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后用于測(cè)定。